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【2018ASH】周文教授口头报告:p53介导的NEK2高表达促使多发性骨髓瘤的进展与复发

2018年12月02日
编译:杜俊
来源:肿瘤资讯

2018年12月1-4日,第60届美国血液学年会(ASH)于美国·圣地亚哥隆重召开。作为全球最顶级的血液学术会议之一,每年的ASH无疑是众咖齐聚、精彩纷呈。p53缺失预示多发性骨髓瘤预后不良,但作为明星分子的NEK2与骨髓瘤预后关系如何,与p53缺失又存在何种联系?目前这一问题尚处于研究阶段。当地时间12月1日,中国医学科学院血液学研究所的周文教授在ASH期间以口头报告的形式为我们在“扑朔迷离”中指明了方向。

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研究题目:High Expression of NEK2 Mediated By p53 Contributes to Progression and Relapse of Multiple Myeloma

时间: 2018年12月1日  3:15 PM  

地点: Grand Ballroom 7 (Marriott Marquis San Diego Marina)

讲者:中国医学科学院血液学研究所  周文教授    

类型:Oral Abstract(192)

研究详情

p53缺失是多发性骨髓瘤(MM)患者的独立预后因素。既往研究发现,NEK2异常高表达与MM患者的预后不良和耐药密切相关。然而,NEK2如何在MM中上调的机制目前未明。通过生物信息学分析,在NEK2启动子中可发现p53蛋白的结合位点,但p53和NEK2在MM中的关系和功能尚不清楚。

在本研究中,p53 -/ - MM细胞系(ARP1和KMS11)和p53 + / + MM细胞系(MM1S和H929)用于研究NEK2在p53 - / - MM细胞中的作用。在MM原代细胞的间期细胞核上进行FISH以检测p53和NEK2拷贝数。应用染色质免疫沉淀和荧光报告系统检测远端NEK2启动子中p53蛋白的结合位点。进行CGH和RNA-seq以验证拷贝数变化和几种转录物表达的变化。

在化疗期间,TT2和TT3患者(GSE2658)中最高10%的具有最高NEK2表达和最低p53的MM患者的OS显著较差(P <0.001),并且NEK2的表达在骨髓瘤细胞中显着增加(GSE19554)。虽然p53随着疾病进展而减少,但表明p53与耐药性有很强的关系。单细胞PCR显示,NEK2表达增加与单个CD138 +浆细胞中p53表达降低相关。FISH证实了CD138 +浆细胞中p53的丢失与NEK2拷贝扩增相关。NEK2也通过免疫荧光(IF)在p53低表达的MM细胞中高表达(P <0.01)。此外,NEK2在p53 - / - MM细胞系和HEK293细胞中通过缺失p53基因和CRISPR技术在mRNA和蛋白水平上调(P <0.01),表明p53与NEK2表达水平之间呈负相关关系。同时,当p53缺失和NEK2过表达同时发生时,不对称有丝分裂和多极分裂的现象更为明显(P <0.001),这表明p53缺失和NEK2过表达的双重打击增加了染色体不稳定性。

进一步的体内研究表明,p53缺失和NEK2过表达组的皮下肿瘤发生明显高于单克隆过表达和p53组缺失组(P <0.001),提示NEK2过表达和p53缺失增强体内致瘤能力。在p53缺失细胞中通过shRNA下调NEK2,在体外和体内抑制细胞生长。为了探索p53和NEK2之间的关系,染色质免疫沉淀和荧光报告系统显示p53可以结合NEK2的启动子区域和调节其转录表达。对HEK293细胞中p53表达缺失的进一步CGH分析发现,p53表达缺失可以直接引起NEK2染色体区域的1q21.4-44扩增,这进一步通过FISH证实。最后,RNA-seq揭示了几种染色体不稳定基因在NEK2过表达和p53缺失双重打击组中的异常表达。

研究结论

总之,p53缺失和NEK2过表达诱导癌细胞耐药、增殖和染色体不稳定。p53可与NEK2的启动子区结合并引起NEK2扩增。p53缺失细胞中shRNA对NEK2的下调,在体外和体内均抑制细胞生长。因此,该研究揭示了NEK2抑制剂的临床前应用的重要性,以克服p53在MM中诱导治疗的耐药性。 

参考文献

      https://ash.confex.com/ash/2018/webprogram/Paper116155.html

责任编辑:肿瘤资讯-Amiee

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