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【2022 EHA 抢先看】ALL篇-ADAM10的脱落酶结构域增强白血病细胞与体内骨髓微环境的相互作用

2022年05月30日
编译:月下荷花
来源:肿瘤资讯

2022年6月9日至12日,由欧洲血液学会(EHA)主办的第27届欧洲血液学大会/年会将在奥地利维也纳举行。该会议是全球血液学领域规模最大的国际会议之一,涵盖血液学研究的各个方面,旨在提高血液疾病的诊疗、展示创新技术、诊断工具和风险评估策略、促进多方合作。2022年6月11日Schmid教授等将口头报告其研究结果,该研究显示在骨髓微环境中ADAM10对维持白血病细胞具有重要作用,ADAM10有望成为治疗急性白血病(AL)的靶点。【肿瘤资讯】特将相关内容整理如下供临床医生参考。

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ADAM10的脱落酶结构域增强白血病细胞与体内骨髓微环境的相互作用

标题:THE SHEDDASE DOMAIN OF ADAM10 AUGMENTS THE INTERACTION OF LEUKEMIA CELLS WITH THE BONE MARROW NICHE IN VIVO AS SHOWN BY RECONSTITUTING PDX LEUKEMIA CELLS WITH CRISPR-CAS9-INDUCED KNOCKOUT

摘要号:Oral S253

研究背景

肿瘤微环境相互作用是白血病形成和维持的重要决定因素。干扰白血病-骨髓相互作用代表了一种有吸引力的治疗AL的方法。功能基因组学显著提高了对每个肿瘤的易感性和基因依赖性的理解。

研究目的

本研究研发了一种CRISPR-Cas9筛选方法,用于对患者衍生异种移植(PDX)AL模型的表面分子进行体内功能分析。

研究方法

CRISPR库的大小通过遗传条码确定。二个PDX标本中荧光标记的Cas9和SgRNA构建体稳定表达。通过MACS富集双阳性细胞并将其注入NSG小鼠。使用MAGeCK算法进行基因缺失分析和体内竞争性功能分析以筛选并验证候选基因。ADAM10 KO细胞或抑制剂(GI254023X)处理细胞的特征通过以下分析明确,包括归因分析植入能力、通过竞争性有限稀释移植分析(LDTA)明确白血病干细胞频度、体内竞争性化疗研究明确二种细胞对常规化疗的敏感性。通过体内竞争性功能分析明确重建ADAM10变体的挽救作用。

研究结果

定制的CRISPR-CAS9对二个AL PDX标本中约100个细胞表面候选分子进行了筛选,鉴定了几个经常缺失的标本特异的候选分子。CRISPR筛选结果在单分子水平得到证实,使用的是体内分子竞争方法,对同一小鼠敲除或不敲除情况下的PDX细胞进行检测,在二个PDX模型体内验证了二个已知缺失的候选分子CXCR4和ITGB1的重要功能。值得注意的是,溶质运载蛋白家族(SLC)成员均不在候选分子中。二个PDX模型中,ADAM10都是常见的缺失候选分子。6例急性淋巴细胞白血病(ALL)或急性粒细胞性白血病(AML)的PDX模型的体内竞争性实验证实了ADAM10的重要作用,而且在AML和ALL中均非常重要,其作用不依赖致癌驱动突变和染色体异常。使用ADAM10化学抑制剂处理PDX细胞,能明显降低其植入骨髓(BM)能力,表明BM微环境中ADAM10对早期植入和归巢过程具有重要作用。敲除ADAM10能降低白血病干细胞频度,表明干细胞比例取决于ADAM10。ADAM10 KO ALL和AML PDX标本显示对常规化疗治疗的敏感性增加,表明ADAM10抑制使AL对常规化疗敏感。ADAM10基因敲除细胞采用不同的重组ADAM10变体进行重建,PDX体内实验表明野生型ADAM10能挽救表型,缺乏酶促结构域的ADAM10变体不能挽救表型,强调 ADAM10的脱落酶活性对维持白血病具有重要作用。

结论


本研究在PDX体内模型中建立了CRISPR-CAS9排除筛选技术,用于探索患者特异性的肿瘤依赖。这项研究发现了ADAM10的一个既往未知功能,即在骨髓微环境中维持患者白血病细胞。因此,ADAM10成为治疗AL的有吸引力的靶点。

参考文献

Philipp Schmid J.. et al; THE SHEDDASE DOMAIN OF ADAM10 AUGMENTS THE INTERACTION OF LEUKEMIA CELLS WITH THE BONE MARROW NICHE IN VIVO AS SHOWN BY RECONSTITUTING PDX LEUKEMIA CELLS WITH CRISPR-CAS9-INDUCED KNOCKOUT.A. EHA Library. Philipp Schmid J. 06/11/22; 357117; S253

 


责任编辑:Luna
排版编辑:Luna