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三级淋巴结构的分布和成熟度可预测胃腺癌患者的临床结果

10月19日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

2024年7月29日，国际知名期刊Frontiers in Immunology发表了一篇原创研究文章，该研究主要调查了三级淋巴结构（TLSs）在胃腺癌（GA）中的预后价值，通过对公共数据库的分析、对样本进行测序，研究结果表明，在胃腺癌中，具有生发中心（GCs）和位于浸润边缘（IM）的三级淋巴结构（TLSs）与患者更好的预后（更长的总生存期）相关。此外，高树突状细胞（DC）评分也预示着良好的预后。研究还发现，DC-LAMP+ DCs在具有GCs的IM-TLSs中富集，FOXP3+CD8+ Treg细胞比例降低，PD1+CD20+ B细胞比例增加。这些结果表明，TLSs的空间分布和成熟度对胃腺癌预后有重要影响，TLSs可能成为评估胃腺癌预后的一个新指标^[1]。【肿瘤资讯】整理该研究要点，以飨读者。

研究背景

胃腺癌（GA）是一种预后不佳的恶性肿瘤，免疫微环境在GA进展中起着关键作用^[2,3]。肿瘤相关三级淋巴结构（TLS）作为局部抗原呈递和淋巴细胞分化的特殊位点，其存在与多种肿瘤的良好预后和对免疫治疗的强烈反应相关^[4-6]。然而，关于GA中TLS的成熟度、空间分布、免疫成分及其与抗肿瘤免疫激活环境之间的关系仍不清楚。

近年来，利用RNA-seq数据研究TLS在肿瘤中的作用取得了进展，为深入探索TLS在GA中的预后价值和免疫成分提供了新的思路和方法^[7]。本研究旨在全面评估GA中TLS的预后价值和免疫成分，并探讨其与抗肿瘤免疫激活环境之间的潜在相关性，为GA的个性化治疗提供新的策略。

研究方法

本研究采用多种方法对GA中的TLS进行全面评估。首先，收集并预处理公共GA RNA-seq数据，利用已发表的基因特征对TLS、GC、DC等进行分类和评分。其次，对FUSCC队列的GA患者H&E染色切片进行回顾性TLS评估，并通过多重免疫荧光（mIF）染色研究不同TLS的细胞组成。最后，使用统计学方法对数据进行分析和可视化，并对TLS+GA样本中独特的基因表达模式进行GSEA富集分析。

研究结果

RNA-seq数据分析表明TLS和GC是GA的有利预后因素

通过分析公共数据库，发现TLS+样本患者的总生存期更长，且TLS与GC高度相关（图1）。进一步研究表明，TLS+GC+组的预后优于TLS+GC-组，提示GC的存在对TLS的预后价值有重要影响。此外，DC评分与GC评分之间存在弱相关性，且TLS+GC+DC+组的预后优于TLS+GC+DC-组，表明DCs是TLS+GC+GA的预后因素。

TLS的成熟度、空间分布与GA患者预后的相关性

为了验证TLS与患者预后之间的相关性，对166名GA患者的临床病理特征和肿瘤相关TLS的连续成熟阶段的发展进行分析。研究发现，高密度的总TLS和位于IM中的总TLS与OS延长显著相关（图2）。此外，高密度的总TLS与GC的OS延长和DSS延长显著相关，而GC位于IM的TLS密度较高与OS、DSS和DFS改善显著相关。多变量Cox回归分析发现，腹膜转移和伴有GC的IM-TLS密度是OS和DFS的独立预后因素。进一步研究表明，GA患者IM-TLS伴GCs密度与组织学分级、肿瘤浸润深度及腹膜转移相关。总之，TLS的空间排列和成熟度与GA患者的预后显著相关，IM-TLS与GC的比例与复发和转移风险的相关性更强，可被视为重要的临床病理参数和强有力的预后指标。

图2. TLS的密度、成熟度和空间分布对患者生存结果的影响

具有GC的IM-TLS中DC浸润增加、Treg浸润减少且B细胞高表达PD1

利用mIF染色技术分析TLS和肿瘤基质中六个免疫亚群的分布差异，发现TLS中的Foxp3+ Treg细胞、CD23+ GC B细胞、DC-LAMP+成熟DC、CD20+ B细胞、CD8+ T细胞、PD-1+细胞和CD20+ FOXP3+细胞的百分比显著高于肿瘤基质（图3，4）。进一步比较了IM-TLS、CT-TLS和伴有或不伴有GC的总TLS之间免疫成分的差异，发现伴有GC的TLS中CD20+、CD23+ GC B细胞和DC-LAMP+成熟DC的百分比显著高于不伴有GC的TLS，且伴有GC的IM-TLS中DC-LAMP+ DC的频率显著高于总TLS或伴有GC的CT-TLS（图5）。此外，有GC的IM-TLS中CD8+ T细胞百分比降低，而总TLS和CT-TLS中PD-1+细胞的百分比增加。通过层次聚类分析发现，有GC的TLS中PD1+CD20+ B细胞的百分比增加，有GC的IM-TLS中CD8+ FOXP3+ Treg细胞百分比显著低于无GC的IM-TLS。值得注意的是，TLS的GC中的B细胞高表达PD1。总之，这些发现表明，GA中存在GC的IM-TLS与DC-LAMP+ DC浸润增加和CD8+ Treg浸润减少有关，且PD1在存在GC的TLS中的B细胞中高度表达。

图3. TLS中mIF染色的单通道和双通道图像

图4. TLS和基质中FOXP3、CD23、DC-LAMP、CD20、CD8和PD-1 的表达

图5.有或无GC的TLS中FOXP3、CD23、DC-LAMP、CD20、CD8和PD-1的表达以及共浸润模式分析

基因集富集分析

为了进一步探索TLS在抗肿瘤免疫中的作用，对TLS+组和TLS-组进行GSEA分析。结果显示，TLS+组中有大量通路富集，其中许多是免疫相关通路，包括参与DC成熟、抗原加工和呈递以及IL12通路的基因集（图6）。这些发现表明，TLS可能通过调节DC成熟和抗原呈递等免疫过程，促进抗肿瘤免疫反应。

图6. GSEA 揭示了 TLS+ 组中与树突状细胞功能和成熟有关的富集通路。

研究讨论

本研究通过RNA测序数据分析和复旦大学上海肿瘤中心GA队列分析，探讨了TLS在GA中的预后价值和潜在机制。研究发现TLS是GA患者的有利预后因素，GC的存在增强了TLS的预后价值。此外，DC被认为是TLS+GC+GA的有利预后因素。进一步研究发现，TLS的空间排列和成熟度与其预后价值相关，具有GC的IM-TLS与延长OS和DFS显著相关。机制研究表明，具有GC的IM-TLS中DC浸润增加、Treg浸润减少，且B细胞高表达PD1，提示IM-TLS与肿瘤免疫激活环境之间存在潜在联系。总之，本研究揭示了TLS在GA中的预后价值和免疫学机制，为GA的个性化治疗提供了新的思路和策略。

结论

本研究揭示了TLS在胃腺癌中的预后价值和免疫学机制，发现具有GC的IM-TLS与患者预后良好相关，并与DC浸润增加、Treg浸润减少以及B细胞高表达PD1有关。这些发现为开发基于TLS的精准疗法提供了新的思路。

审批编号：CN-144912

有效期至：2025-3-31

声明：材料由阿斯利康支持，仅供医疗卫生专业人士参考

参考文献

1. Sun H, et.al. The distribution and maturation of tertiary lymphoid structures can predict clinical outcomes of patients with gastric adenocarcinoma. Front Immunol. 2024 Jul 29;15:1396808.
2. Sung H, et.al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries. CA Cancer J Clin. 2021 May;71(3):209-249.
3. Derks S, et.al. Characterizing diversity in the tumor-immune microenvironment of distinct subclasses of gastroesophageal adenocarcinomas. Ann Oncol. 2020 Aug;31(8):1011-1020.
4. Calderaro J, et.al. Intra-tumoral tertiary lymphoid structures are associated with a low risk of early recurrence of hepatocellular carcinoma. J Hepatol. 2019 Jan;70(1):58-65. doi: 10.1016/j.jhep.2018.09.003. Epub 2018 Sep 11.
5. Hiraoka N, et.al. Tertiary Lymphoid Organs in Cancer Tissues. Front Immunol. 2016 Jun 22;7:244. doi: 10.3389/fimmu.2016.00244.
6. Goc J, et.al. Dendritic cells in tumor-associated tertiary lymphoid structures signal a Th1 cytotoxic immune contexture and license the positive prognostic value of infiltrating CD8+ T cells. Cancer Res. 2014 Feb 1;74(3):705-15.
7. Jia W, et.al. Protective effect of tertiary lymphoid structures against hepatocellular carcinoma: New findings from a genetic perspective. Front Immunol. 2022 Sep 14;13:1007426.

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排版编辑：肿瘤资讯-Rex