点评：张会来教授
单位：天津医科大学肿瘤医院
一年一度美国血液学会年会（ASH）即将再次来临，此次会议已是63届，定于2021年12月11-14日举行。在这个血液学界最高规格的会议上，多项重磅研究最新结果公布。【肿瘤资讯】特邀天津医科大学肿瘤医院张会来教授团队针对滤泡淋巴瘤的多项重磅研究进展作了翔实盘点，内容如下。
现任天津医科大学肿瘤医院淋巴瘤内科主任
主要研究方向：恶性淋巴瘤的分子诊断和个体化治疗
中国抗癌协会淋巴瘤专业委员会副主任委员
中国临床肿瘤学会（CSCO）抗淋巴瘤联盟常委
中国医疗保健国际交流促进会肿瘤内科分会副主任委员
中国老年保健协会淋巴瘤专业委员会副主任委员
中国临床肿瘤学会（CSCO）肿瘤心脏病学专委会常委
中华医学会肿瘤分会淋巴瘤学组委员
天津市抗癌协会淋巴瘤专业委员会主任委员
天津市血液病质控中心副主任委员
天津市医师协会血液医师分会副会长
在Gallium试验的滤泡性淋巴瘤患者中，不管EZH2突变状态如何，EZH2 基因表达特征均可预测化疗疗效
原标题：An EZH2 Gene Expression Signature Is Predictive of Differential Efficacy of Chemotherapy Irrespective of EZH2 Mutation Status in Patients with Follicular Lymphoma Treated within the Gallium Trial
摘要号：39
Session：621. Lymphomas: Translational
时间：2021 年 12 月 11 日 星期六上午 9:30
研究背景
化疗联合抗 CD20 抗体是目前有症状的进展期滤泡性淋巴瘤 (FL) 患者的标准治疗方法。在 GALLIUM 试验中，EZH2 突变状态可以预测化疗疗效(Jurinovic, ASH 2019)。早期我们定义了一个与EZH2基因突变状态显著相关的基因表达谱(GEP) signature (Pastore, Lancet Oncol 2015)。本研究的目的是在 GALLIUM 试验中探索EZH2 GEP signature对治疗的预测效能。
研究方法
研究招募了 1202 名 FL 患者，随机接受利妥昔单抗（R）或奥比妥珠单抗（G）为基础的治疗(Marcus, NEJM 2017)。化疗方案包括CHOP、CVP或苯达莫司汀。研究分析了所有134例可用的DNA和转录组测序数据。
研究结果
使用无监督的 k-means 算法识别了2个 GEP cluster：EZH2_mut和EZH2_WT，每组包括67名患者（图 A）。使用基于CHOP/CVP 的方案治疗，EZH2_mut的患者相对于EZH2_WT的患者具有显著更长的PFS（HR=4.99，P=0.002），而EZH2 GEP signature在接受基于苯达莫司汀治疗的患者中没有预测性（图 B）。EZH2基因突变在 EZH2_mut cluster中显著富集（30% vs. 13%；P = 0.034）。值得注意的是，在EZH2_mut cluster中，有47例患者没有EZH2突变，这部分患者在使用基于CHOP/CVP的方案时也具有更长的PFS（HR=4.74，P=0.007）；在EZH2_WT cluster中，无EZH2突变的患者在使用基于苯达莫司汀的方案中具有更长的 PFS（HR=0.36, P=0. 03) (图 C)。通过DNA测序数据发现，7号染色体 (chr7) 扩增（包含 EZH2基因）在 EZH2_mut cluster中显著富集（21% vs. 7%，P=0.04）。与没有 EZH2 拷贝数改变 (CNA）或突变的病例相比，具有chr7 扩增的患者EZH2 mRNA 表达水平显著增加（P<0.0001）。单因素分析发现，TNFRSF14 (49% vs 24%), BCL7A (28% vs 8%), GNA13 (15 vs 7%), SOCS1(19 vs 8%), 和HVCN1 (13 vs 7%) 在EZH2_mut cluster中具有更高的突变频率，但多重检验矫正后，这些基因在两组中没有显著差异。GSEA结果显示，mTORC1信号、MYC和E2F靶基因在EZH2_mut cluster中显著富集。在无EZH2突变的EZH2_mut cluster患者中，其肿瘤微环境 (TME) 组成与具有EZH2突变的FL更相似，特别是与无EZH2突变的EZH2_WT cluster患者相比，具有更高的滤泡辅助T细胞(TFH) (P=0.003)和M0巨噬细胞(P<0.001)浸润。
研究结论
EZH2 GEP signature（i）与 EZH2 基因突变状态显著相关；（ii）在无 EZH2 突变但具有其他遗传改变的患者（47/105，45%）中也可观察到（包括chr7 扩增/EZH2过表达）；（iii）与富含 TFH 细胞和 M0 巨噬细胞的独特 TME 组成相关；（iv）预测化疗联合抗 CD20 抗体（R或G）的治疗疗效。
EZH2突变型滤泡淋巴瘤进展和转化过程中肿瘤微环境的演变
原标题：Evolution of the Tumor Microenvironment throughout Progression and Transformation of EZH2 Mutant Follicular Lymphoma
摘要号：446
Session： 621. Lymphomas: Translational
时间：2021 年 12 月 12 日 星期日下午12:15
研究背景
FL具有丰富的微环境，最显著的特征是广泛的滤泡树突状细胞网络，FDC与淋巴瘤细胞广泛接触。最近有研究表明，在生发中心 B细胞（GCB）中EZH2突变主要是减弱生发中心B细胞对辅助T细胞的依赖以及加强与FDCs免疫突触的形成，导致GCB的异常增殖和存活。
研究目的
评估EZH2突变型淋巴瘤进展和转化过程中肿瘤微环境(TME)的演变。
研究方法和结果
通过基因工程编辑技术，构建在GCB细胞中条件性表达功能获得性EZH2突变体和BCL2(以下简称BCL2/Ezh2Y641F)，该小鼠模型发展为低级别滤泡样淋巴瘤，其特征为扩增的滤泡，主要由肿瘤性GCB细胞和广泛的FDC网状细胞组成，同时存在CD4+、TFH和调节性T细胞。随着时间的推移，这些低级别FLs进展到高级别。此外，作者将原始的BCL2/Ezh2Y641F低级别FL细胞转到免疫缺陷的Rag1KO小鼠，构建了转化的FL细胞系，后进一步将该细胞系转入具有免疫功能的C57BL6小鼠体内，该细胞系成功植入并归巢到淋巴器官。该细胞系由高增殖的GCB细胞组成，多核不规则，染色质开放，核仁突出，类似DLBCL。C57BL6小鼠肿瘤微环境的特征是滤泡结构破坏，FDC网严重减少或缺失，CD4+、CD8+和Treg减少，MHC-I和MHC-II下调。因此，小鼠模型也概括了进展和转化阶段。作者还构建了更具侵袭性的DLBCL EZBMYC亚型的小鼠模型。随后，将来自BCL2、BCL2/Ezh2Y641F、BCL2/MYC 和 BCL2/Ezh2Y641F/MYC 小鼠的骨髓细胞注射到受致命辐射的 C57BL6 小鼠中。受体小鼠（每组n=5）用 SRBC 免疫以诱导GC形成，并在移植后 5.5 个月处死。所有基因型小鼠的脾脏和淋巴结中均可观察到FAS+CD38-BCL2GFP+GCB细胞的扩增；然而，在有或无 MYC 的情况下，Ezh2Y641F 与 Ezh2 WT 相比，其GCB细胞的比例显着增加。相反，FAS-CD38+BCL2GFP+ 和 CD138+BCL2GFP+ 细胞在 MYC+ 小鼠中显着增加，在 Ezh2Y641F 中减少，表明 Ezh2 突变是维持GC表型所必需的。在 BCL2/MYC 小鼠中进一步发生Ezh2Y641F突变后，可诱导TME 中 CD4+ 和 CD8+ 的减少，并降低 TFH，而 GC中TFR 比例没有变化。 值得注意的是，FDC 网状结构在 MYC+ 病例中显着缩小，并可通过Ezh2Y641F部分恢复，表明 MYC 过表达可能有助于获得FDC 独立性，以促进淋巴瘤细胞存活。
研究结论
FL的进展显著影响TME，额外突变的获得，如MYC，可以改变TME中淋巴瘤细胞和肿瘤支持免疫细胞之间的相互作用。
限制性滤泡性淋巴瘤（Constrained FL）:一个遗传学独特的滤泡性淋巴瘤亚群，具有低体细胞超突变率和低组织学转化倾向
原标题：Constrained FL: A Genetically Distinct Subgroup of Follicular Lymphoma with Low Rates of Somatic Hypermutation and a Reduced Propensity for Histologic Transformatio
摘要号：807
Session： 621. Lymphomas: Translational
时间：2021 年 12 月 13 日 星期一：下午 5:00
研究背景
滤泡性淋巴瘤(FL)是一种惰性淋巴瘤，8-15%的患者会发生组织学转化为侵袭性弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。目前对 FL 和 tFL 遗传学的认识多基于小队列的测序或靶向测序研究，而非编码区突变及体细胞超突变(aSHM)在预测HT方面尚未充分阐明。
方法
对212例 FL(其中24例后续发生转化)及241例新诊断DLBCL患者进行全基因组测序(WGS)。分离探针荧光原位杂交(BA-FISH)用于识别MYC，BCL2和BCL6易位，IGH/BCL2双融合探针(DF-FISH)识别FL子集。使用dNdS、MutSigCV、HotMaps和 OncoDriveFML 鉴定显著突变基因 (SMG)。对于38个超突变区域，使用特定于区域的阈值将数据二进制化为aSHM/no aSHM。在FOXO1，MYD88L256P，CREBBP KAT结构域，EZH2Y646，MEF2B和STAT6中经常发生的错义突变与这些基因中的其它突变分别列出。应用后续未发生转化的FL和所有可用的新诊断DLBCL数据创建随机森林分类法，对此两类群体分类。应用127个tFL验证队列对该分类进行验证。
这一大型FL和DLBCL基因组队列使得能够识别出一系列新的和已知的FL驱动基因，并识别SMG和CNV之间不同的遗传特征。相较于DLBCL，FL显著富集的突变包括CREBBP KAT结构域(OR 11.5, P<0.0001)，RRAGC (OR 9.61, P<0.001)以及 ATP6V1B2 (OR 11.17, P<0.001)。CNV水平上，ARID1A (OR 4.74, P<0.1), PTEN (OR 3.65, P<0.01), TNFRSF14 (OR 3.31, P<0.01)的缺失在FL中显著富集。在156例FL中，24例（15%）患者BCL2易位阴性，但其中4例（17%）在WGS数据中识别为BCL2易位阳性，这4例后续经过IGH/BCL2 融合探针确认。以0.7为阈值，线性模型将发现队列的FL病例分为DLBCL-like组(dFL，n=107)，以及一个富含 FL 相关特征的遗传同质亚组(cFL，n=105)。相较于cFL，dFL中一些aSHM位点的富集(包括BCL6、BCL7A、DTX1 和 ZFP36L1 的转录起始位点)进一步支持了该分类(图1)。tFL的靶向捕获验证队列中，30例(24%)归为cFL，97例(76%)归为dFL。与FL发现队列相比，tFL队列中CREBBP KAT结构域突变显著减少(OR 0.59，P<0.05)，且被归为cFL的频率显著降低(OR 0.30，P<0.0001)。
cFL和dFL之间的差异很大程度由CREBBP KAT 结构域突变和aSHM占全基因组的比率决定。鉴于FL中CREBBP为早期克隆性突变及其对生发中心的作用，推测CREBBP KAT结构域突变可能将FL限制于暗区，减少发生aSHM的机会，并产生一种限制HT的进化模式。这种分类可以作为一种有用的生物标志物，用于识别HT高风险的FL。
低级别FL是目前临床上常见的惰性B细胞淋巴瘤，滤泡淋巴瘤的遗传特征包括BCL2易位和表观遗传修饰基因(如EZH2)的体细胞突变。化疗联合抗 CD20 抗体（利妥昔单抗R或奥比妥珠单抗G）是目前有症状的进展期FL (FL) 患者的标准治疗方法。此次ASH会议上，Oral 39报道，在GALLIUM试验中，在 22% 的病例 (93/418) 中发现 EZH2 突变，在接受 CHOP/CVP 方案（使用利妥昔单抗 (R) 或奥比妥珠单抗 (G)）治疗时，EZH2突变的患者拥有更长的无进展生存期 (PFS) ，EZH2突变状态在接受基于苯达莫司汀方案的患者中没有预测性。
那么，EZH2的突变状态是否在FL向弥漫大B细胞淋巴瘤转化过程中发挥一定的作用，Oral 446报道，来自美国的学者利用EZH2小鼠移植模型研究了EZH2突变型淋巴瘤进展和转化过程中肿瘤微环境(TME)的演变。研究表明，EZH2突变小鼠更容易出现FL向弥漫大B细胞淋巴瘤（GCB亚型）的转化，在转化过程中，肿瘤微环境发生改变，并获得额外的突变，如MYC，改变了肿瘤微环境中淋巴瘤细胞和肿瘤支持免疫细胞之间的相互作用。
来自Oral 807的研究表明FL具有一个遗传学独特的亚群，该亚群具有低体细胞超突变率和低组织学转化倾向。根据基因遗传学特征，研究者将FL分为DLBCL-like组 (dFL)，以及一个富含 FL 相关特征的遗传同质亚组(cFL)。这种分类可以作为一种有用的生物标志物，用于识别HT高风险的FLs。
[1]https://ash.confex.com/ash/2021/webprogram/Paper147751.html
[2]https://ash.confex.com/ash/2021/webprogram/Paper149679.html
[3]https://ash.confex.com/ash/2021/webprogram/Paper149679.html
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