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病例分享 | CD19阴性表达的弥漫性大B细胞淋巴瘤，你遇到过吗？

2019年01月26日

编译：月下荷花

来源：肿瘤资讯

CD19是B细胞标志物，前B细胞即有表达，仅在终末分化为浆细胞时才消失。CD19是跨膜糖蛋白，对PI3K或Src家族激酶转导的生存通路具有激活作用，失活会损害B细胞发育。因此，CD19在B细胞肿瘤中的表达高度保守，也成为B细胞恶性肿瘤的治疗靶点。Delage医师在Haematologic杂志上报道了一例CD19阴性弥漫性大B细胞淋巴瘤，让我们一起解读这个病例。

病例介绍

患者女性，76岁，因“虚弱、持续发热和盗汗”入院。体检脾肿大，CT示脾甲乙线20cm。血液和骨髓涂片发现20%的不典型淋巴样细胞，染色质疏松，部分细胞可见核仁，胞质中度嗜碱（图1A）。免疫表型分析显示，强表达CD45和B细胞分化标记（CD20、CD79b、CD22），单一κ轻链表达，CD19阴性，其他B细胞CD19阳性（图1B），淋巴瘤细胞表达MUM1，不表达浆细胞分化标志CD38、CD138，也不表达ALK蛋白。骨髓活检证实该患者为弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL；图1C），经反转录多重连接探针扩增检查确认为活化B细胞亚型。石蜡切片荧光原位杂交显示3q27位点（BCL6）增加，未发现CMYC、BCL2或CCND1位点重排。国际预后评分5分[乳酸脱氢酶（LDH）840IU；ECOG评分3分；年龄＞60岁；结外受累（骨髓），Ⅳ期]。HIV阴性。

该患者接受8周期R-CHOP方案治疗和鞘内甲氨蝶呤预防性治疗，4周期后行PET检查，结果显示该患者获得完全代谢缓解，治疗结束时仍为缓解状态。

寻根溯源

为了明确CD19阴性原因，应用CD20细胞分选纯化淋巴瘤细胞，单核苷酸多态性阵列基因组杂交比较发现了1个单亲二倍体，累及16号染色体短臂，该区域包含编码CD19的位点（16p11.2，图2A）。对生殖细胞（CD20阴性）的CD19基因Sanger测序未发现任何异常，但在淋巴瘤细胞中发现1个纯合剪接突变（c560-1G>C，nm 001178098.1；图2B）。应用RT-PCR检测该突变在内含子3（外显子3和4之间）区域上的转录结果，证实这名患者该区域扩增片段大于对照（图2C），Sanger测序证实是由内含子3保留所致。为排除基因组DNA污染，在无反转录酶情况下进行扩增则不能观察到上述结果。因此，内含子3保留导致翻译23个氨基酸后终止密码子过早出现，造成CD19阴性（图2D）。

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图1 CD19阴性弥漫大B细胞淋巴瘤的诊断。A.骨髓涂片中的淋巴瘤细胞。B.流式细胞分析中的淋巴瘤细胞（红）和残留的正常B细胞（蓝），左侧为CD19和CD20，右侧为κ轻链和λ轻链。C.骨髓活检见弥漫大B细胞淋巴瘤浸润

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图2 CD19失活的分子机制。A.单核苷酸多态性阵列基因组杂交比较发现了16号染色体短臂单亲二倍体。B.生殖细胞CD19基因Sanger测序未发现任何异常（左），淋巴瘤细胞中发现纯合剪接突变（c 560-1G>C，nm 001178098.1;右）。C.患者cDNA保留了内含子３，使得患者该区域片段大小超过正常对照。D.CD19阴性DLBCL分子机制模式图

由于该患者只评估了CD19细胞膜的表达，因此不能排除胞内表达一种可以激活信号通路的截短CD19蛋白。CD19阴性在浆母细胞淋巴瘤中很常见，此类淋巴瘤还同时表达其他浆细胞标记物如CD138或CD38，不表达B细胞标记物如CD20和CD19。该患者未表达任何浆细胞标记物，亦无其他B细胞标记物缺失，如CD20或CD79b，因此可排除浆母细胞淋巴瘤。ALK蛋白阳性弥漫大B细胞淋巴瘤也有B细胞标记物丢失，但该患者ALK蛋白阴性。有些弥漫大B细胞淋巴瘤病例免疫组化显示CD19阴性，但未采用更敏感的流式细胞术。

临床启示

在CD19为靶点的CAR-T细胞治疗急性淋巴细胞白血病时，因治疗压力选择可出现CD19剪接突变亚克隆使得CD19表达阴性，这种亚克隆具有生存优势，但本例弥漫大B细胞淋巴瘤CD19阴性则未经治疗压力选择。由于CD19广泛用于B细胞的流式细胞分析，因此弥漫大B细胞淋巴瘤缺乏CD19表达会影响疾病诊断。更重要的是，如果考虑使用靶向CD19的靶向治疗（如CAR-T细胞）时，评估CD19表达非常重要，阴性病例不会从治疗中获益。

参考文献

DELAGE L, MANZONI D, QUINQUENET C，et al. Molecular analysis of a CD19 negative diffuse large B cell lymphoma[J]. Haematologica 2018.

责任编辑：肿瘤资讯-Amiee