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CCR：脑脊液循环肿瘤细胞在NSCLC脑膜转移的“液体活检”作用

2017年06月26日

来源：肺癌前沿

点评与讨论

1. 脑膜转移诊断如何明确？CSFCTC是否足以明确脑膜转移？

脑膜转移的诊断依赖于头颅MRI的典型表现或是TCT阳性，然而这两个传统的诊断方法均存在不足。柔脑膜转移的诊断目前的观点是在MR上典型表现或是脑脊液找到肿瘤细胞；只要脑脊液找到肿瘤细胞，就认为是LM；捕获到CSFCTCs在这里就认为是肿瘤细胞。

2. CSFCTC检测方式及优势？

在本研究中，将cellsearch技术应用于捕获脑脊液肿瘤细胞，结果显示CSFCTCs的敏感性显著优于MRI及TCT。Cellsearch技术捕获外周血CTCs已广泛应用于肺癌、乳腺癌、前列癌、直肠癌等多种肿瘤的随访与预后监测，其主要是识别肿瘤细胞的EpCAM抗原而进一步识别并分离肿瘤细胞，而将其改造并应用于捕获脑脊液循环肿瘤细胞近年来引起了越来越多的关注。

Cellsearch通过EpCAM抗体可识别脑脊液肿瘤细胞上的EpCAM抗原，可显著提高敏感性；且Cellsearch系统采用的是半自动的诊断方法(CK+/DAPI+/CD45−)，而传统的TCT更多的依赖病理医师的丰富经验。随着靶向药物的广泛应用，晚期NSCLC患者的生存期已显著延长，而脑膜转移患者的预后仍不理想，早期识别并诊断，有助于早期干预，而 CSFCTCs在其中发挥了重要作用。此外，本研究还首次证实同一个患者的CTCs数量上显著低于CSFCTCs，提示CSFCTCs可能更能代表脑膜转移的颅内疾病状态。

3. CSFCTC是否对颅内病灶进展的耐药机制具有提示意义？

在我们既往报道中发现，脑膜转移更常见于EGFR突变的患者，故本研究更多地关注EGFR突变阳性的非小细胞肺癌患者，以期有更多的探索与发现。EGFR T790M 是第一代EGFR-TKI的最常见耐药突变，然而在本研究中，9例患者中的7例在颅外病灶检测EGFR基因常见耐药突变EGFR T790M, 然而在CSFCTCs中，14例患者检测EGFR常见突变，仅一例患者检测EGFR T790M，这与既往小样本研究发现EGFR T790M在CNS 病灶或CSF cfDNA 比颅外病灶更少见是一致的。这可能是颅内EGFR-TKI低及T790M的空间异质性相关，T790M阴性的肿瘤细胞可出现更强的侵袭性及发生远处转移，提示脑膜转移有可能存在其他发生机制. 其他的耐药基因同样在CSFCTCs 检测到：包括检测到MET扩增同时在EML4-ALK 重排的patient 3 和EGFR del19的patient 14 中，而检测到PIK3CA exon2 N107S 及MET exon11 F839L 同时在携带EGFR L858R 突变的patient 18，检测到ERBB2 exon8 T328fs及 ROS1 exon7 W215X 同时在携带EGFR del19缺失的patient 9。然而这些突变与脑膜转移的发生是否存在直接驱动作用仍需要更多的研究证实。此外，Cellsearch通过EpCAM抗体可识别脑脊液肿瘤细胞上的EpCAM抗原而识别并分离CSFCTCs，本研究中对这些CSFCTCs进行二代测序，有可能会漏掉一些EpCAM阴性的肿瘤细胞，而这也是有可能的，因肺癌患者的EpCAM变换多样；同样漏掉的EpCAM阴性的CTCs有可能携带着其他的遗传信息，有可能携带其他耐药或驱动基因，这需要更多的研究进一步验证。

4. CSF抽取量是否会影响CSFCTC提取？不同检测CSFCTC量是否对患者生存预后及疾病进展状态具有提示预测作用？

取样过程并未考虑到这个问题，一开始是参考外周血的7.5ml标准，基于颅压低或其他原因个别患者无法留置7.5ml就添加PBS至7.5ml，其中只有一位患者未检测到CSFCTCs，无法分析不同脑脊液量下是否存在CSFCTC检测差异。

5. 有无症状或不同基因状态下，CSFCTC与传统检测方法是否存在差异？

CSFCTCs其优势就在于敏感性会高于TCT，那么在组织病灶难以获取的情况，CSFCTCs可以提供病理诊断而且是进一步的基因检测，这两点TCT和MR无法做到。

本研究中有比较过CSFCTCs数量的多少与TCT检测率的关系，并无阳性结果；样本量太少，这个小课题中并无确切地区分出哪些病人更加合适CSFCTCs检测。后续会进一步探究CSFCTCs在动态监测颅内病灶的疗效及预后方面的作用意义。

参考文献

Jiang BY*, Li YS*, Guo WB*, Zhang XC, Chen Z, Su J, Zhong W, Yang XN, Yang J, Shao YW, Huang B, Liu YH, Zhou Q, Tu HY, Chen HJ, Wang Z, Xu C, Wang BC, Wu SY, Gao CY, Zhang X, Wu YL. Detection of Driver and Resistance Mutations in Leptomeningeal Metastases of NSCLC by Next-Generation Sequencing of Cerebrospinal Fluid Circulating Tumor Cells. Clin Cancer Res 2017 Jun 12. pii: clincanres.0047.2017. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-17-0047. [Epub ahead of print]

Yang-Si Li, Ben-Yuan Jiang, Jin-Ji Yang, Hai-Yan Tu, Qing Zhou, Wei-Bang Guo, Hong-Hong Yan, Yi-Long Wu. Leptomeningeal metastases in non-small cell lung cancer patients with EGFR mutations. Journal of Thoracic Oncology 2016 Jun 19. pii: S1556-0864(16)30626-8 doi: 10.1016/j.jtho.2016.06.029

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