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HRP卵巢癌治疗新探索：尼拉帕利与新抗原反应性T细胞治疗展现协同抗肿瘤作用

2024年12月18日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

卵巢癌是女性生殖系统恶性肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤。在中国，2022年预计有近5.7万的卵巢癌新发病例和3.9万的死亡病例，且呈上升趋势。由于起病较为隐匿，早期患者缺乏特异性症状及特征，约70%的患者诊断时即为晚期，5年生存率为30%~40%^[1]。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）抑制剂的出现，大大改变了晚期卵巢癌的治疗格局，一系列临床研究显示，晚期同源重组缺陷（HRD）卵巢癌患者在一线肿瘤细胞减灭术和含铂化疗获得完全缓解（CR）或部分缓解（PR）后，PARP抑制剂维持治疗可进一步延长生存。然而，对于大约 50% 同源重组修复完整（HRP）的卵巢癌患者来说，PARP抑制剂维持治疗获益往往较低。PRIMA和PRIME研究显示，尼拉帕利可显著延长HRP人群无进展生存期（PFS）——中位PFS为8.1个月（PRIMA研究）和14个月（PRIME研究）^[2]，但仍未达到HRD患者获益，凸显了探索新联合治疗方法的迫切需要。

近年来，免疫治疗作为第4大抗肿瘤治疗方法，为肿瘤治疗带来了突破性进展，然而由于卵巢癌属于“冷”肿瘤，对于免疫治疗敏感性较差，多项大型Ⅲ期研究纷纷折戟。但免疫治疗作为一种极具前景的治疗手段，有望为卵巢癌患者带来更多获益可能，因此如何进一步发挥免疫治疗疗效，相关探索一直在进行中。近期，Translational Oncology期刊发表了一项小鼠模型研究^[3]，探索了尼拉帕利与新抗原反应性免疫细胞（NRT）疗法联合用于HRP小鼠卵巢癌模型中疗效，结果显示，尼拉帕利与NRT联合可发挥协同抗肿瘤作用，为临床治疗HRP带来了新思路。【肿瘤资讯】特对研究主要内容进行整理，以飨读者。

研究方法

研究者对6-8周雌性C57BL/6小鼠皮下注射ID8细胞（HRP细胞系），建立卵巢癌模型，并监测肿瘤生长。通过对ID8细胞和C57BL/6小鼠尾组织全外显子组测序（WES）、RNA测序（RNA-seq）和转录组测序，分析潜在新抗原，并基于潜在新抗原制备个性化的新抗原长肽疫苗，进而生成了NRT。

在治疗方面，研究者们通过流式细胞术和ELISpot实验评估了NRT的免疫活性，并在小鼠模型中测试了尼拉帕利单独使用和与NRT联合使用时的体内抗肿瘤效果。此外，通过免疫细胞浸润分析、基因集富集分析（GSEA）和免疫荧光分析等方法，进一步验证了尼拉帕利对TIME的影响，并评估了联合治疗的疗效。

研究结果

尼拉帕利促进肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）M1表型极化和CD8+ T细胞浸润

通过转录组测序和免疫细胞浸润分析评估尼拉帕利给药前后TIME（肿瘤免疫微环境）的变化。结果显示，与对照组相比，尼拉帕利治疗导致M1-TAMs和激活的CD8+ T细胞比例增加，而M2-TAMs比例减少（图1a和b）。基因集富集分析（GSEA）显示，在尼拉帕利治疗后，在961个富集（P < 0.05）基因集中，567个基因集显著富集（P < 0.01），351个基因集（包括与未成熟树突状细胞和干扰素α相关的基因集）上调，216个基因集下调（图1c）。与细胞因子和趋化因子相关的基因集上调（图1d-f），表明趋化因子可能在TIME的调节中发挥重要作用。提示尼拉帕利可促进CCL5、CXCL9、CXCL10等趋化因子表达和分泌，然后通过诱导CD8+ T细胞的激活和浸润，以及TAMs从M2表型极化为M1表型，从而与免疫治疗发挥协同作用（图1）。

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图1. 尼拉帕利对ID8卵巢癌TAMs和CD8+T细胞浸润的影响

新抗原反应性T细胞（NRT）具有较好免疫原性

对ID8细胞系和C57BL/6小鼠尾部组织进行了WES和RNA-seq分析，选择了前10个新抗原，并成功制备了8个NeoVAC，然后制备了具有良好免疫原性的NRT。通过将成功制备的新抗原肽与树突状细胞（DCs）共培养，获得新抗原DCs（Neo-DCs），并与携带肿瘤的小鼠T细胞共培养，然后在体外扩增。通过流式细胞术分析与Neo-DCs共培养8小时后的NRT中CD3+CD137+ T细胞的比例，以评估激活T细胞的数量。结果表明，NRT中CD3+/CD137+ T细胞比例为8.48%，显著高于对照组的0.23%（图2a和b）。此外，通过用每个新抗原肽刺激DCs来诱导NRTs的体外激活。通过ELISpot实验检测IFN-γ的释放来评估活细胞的免疫反应性。使用ImageJ软件计数荧光点，结果表明，用新抗原肽刺激后产生的荧光点数量是常规T细胞的两倍多。以上数据提示NRT具有较好的免疫原性。

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图2. NRT细胞制备、功能和免疫应答评估

尼拉帕利和NRT发挥协同抗肿瘤作用

当肿瘤可以触及时，将小鼠随机分为四组：对照组（注射PBS）、尼拉帕利组（注射尼拉帕利）、NRT组和联合组（尼拉帕利+NRT）（图3a）。对肿瘤体积和生存分析的统计分析表明，与单一药物组相比，联合组肿瘤生长减缓（图3b和d），生存期延长（图3c）。表明，尼拉帕利和NRT联合在携带ID8卵巢癌的C57BL/6小鼠中产生了协同抗肿瘤效应。安全性分析显示，所有组小鼠体重均随时间增加，组间无显著统计学差异（图3e）。尽管与正常参考范围相比，白细胞（WBC）和天冬氨酸转氨酶（ALT）等个别指标略有升高，但主要生化指标在各组间无显著统计学差异（图3f）。使用H&E染色对主要器官（心、肺、肾和肝）进行组织病理学分析，结果显示所有组小鼠的组织结构正常，尽管一些器官出现轻度慢性粒细胞浸润但无明显损伤（图3g）。表明尼拉帕利联合NRT治疗不会引起器官免疫相关不良事件，尼拉帕利和NRT联合具有较好的安全性。

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图3. ID8小鼠模型体内抗肿瘤试验

与NRT组相比，联合组肿瘤组织M1极化和CD8+ T细胞浸润增加，免疫相关趋化因子和信号通路富集

为进一步验证尼拉帕利调节TME的作用，研究者对体内实验肿瘤组织进行CD3/CD137免疫荧光染色分析。结果表明，所有实验组中CD3+ T细胞和CD137+ T细胞（激活的T细胞）浸润增加，联合组最为明显（图4a和b）。此外，对M1标记CD86和M2标记CD206的免疫荧光染色分析显示，与对照组和NRT组相比，尼拉帕利组和联合组中CD86表达增加（图4c）。

对NRT组和联合组肿瘤组织进行转录组测序分析。免疫细胞浸润分析显示，与NRT组相比，联合组中M1表型比例增加，M2表型比例减少，激活的CD8+ T细胞比例增加（图4d和e）。KEGG通路GSEA分析显示，细胞因子和趋化因子相关基因集富集（图4g和h），JAK-STAT通路、T细胞受体反应和抗原处理及呈递通路富集上调（P < 0.001）（图4i和k）。

为了解联合治疗后的功能富集，进一步分析了HALLMARK基因集，发现IL6/JAK/STAT3通路、INFα、INFγ、TNFα和炎症相关基因集富集显著上调（图4l和p），缺氧和血管生成相关基因集富集上调（图4f）。

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图4. 各组免疫荧光染色分析及转录组测序结果

研究结论

该研究显示尼拉帕利能够通过调节HRP卵巢癌中的TAMs和CD8+ T细胞浸润重塑肿瘤微环境，并与NRT治疗产生协同抗肿瘤作用。这一发现为尼拉帕利和NRT的联合治疗提供了理论基础，并为HRP卵巢癌的联合免疫治疗提供了新的思路。

参考文献

1. 李洁, 姜洁. 卵巢癌靶向治疗应用及进展. 中国妇产科临床杂志, 2024年7月第25卷第4期.
2. 李一帆, 李宁. 中国卵巢上皮癌靶向治疗现状及进展. 中国妇产科临床杂志. 2023年3月第24卷第4期.
3. Lu J, Liu H, Wang B, et al. Niraparib plays synergistic antitumor effects with NRT in a mouse ovarian cancer model with HRP. Transl Oncol. 2024 Nov;49:102094.

责任编辑：肿瘤资讯-Elva
排版编辑：肿瘤资讯-展思懿

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