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【文献精读】慢性淋巴细胞白血病辅助诊断检测的现状

2023年08月25日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

摘要：慢性淋巴细胞白血病（CLL）是一种异质性疾病，患者预后可变，多学科评估（即流式细胞术、免疫组织化学、分子和细胞遗传学分析）在诊断和预后评估中很重要，并允许在随访期间跟踪可测量的残余疾病，从而影响治疗管理。本期【文献精读】对慢性淋巴细胞白血病辅助诊断检测的现状进行了整理，与读者分享。

概括

CLL/SLL在形态学、免疫表型、染色体异常和基因突变方面表现出很大的异质性。因此，CLL/SLL的自然病程变化极大。CLL/SLL的诊断方法是血液病理学中多学科标本评价的典型。通过流式细胞术和免疫组织学证明经典免疫表型是基本标准的一部分，如更新的WHO-HAEM 5所强调的。样本的细胞遗传学和分子遗传学表征不一定是诊断所需的，但却是用于预后目的的推荐研究，并且可能在选择个性化治疗方法中发挥重要作用。每名新诊断为CLL的患者都接受了通过流式细胞术进行的外周血样本评估、CLL间期荧光原位杂交（FISH）分析、靶向下一代测序（NGS）面板和免疫球蛋白重链基因可变区（IGHV）评估，如CLL国际研讨会共识指南所建议的。复发性疾病患者用流式细胞术、FISH和NGS进行重复评估。如果对淋巴结活检进行诊断评价，作者进行确证性免疫组织化学、流式细胞术和完整的细胞遗传学分析，包括核型分析和间期CLL FISH。

流式细胞术

CLL细胞具有特征性的免疫表型;因此，流式细胞术分析通常用于这些患者的诊断和临床随访（表1）。肿瘤细胞通常表达单型表面免疫球蛋白M（IgM;dim），IgD（部分），CD5，CD19，CD20（dim），CD23，CD43，CD200（+）和ROR1（+），FMC7、CD10、CD25、CD22/CD79b（与正常 B 细胞相比表达较弱或缺失）、CD81、CD103或 SOX11（-）。流式细胞术使单型轻链表达阴性是另一个特征，可能存在非典型免疫表型，包括 CD5 或 CD23 阴性、FMC7 或 CD79b 阳性或CD 20或表面免疫球蛋白强表达。2018年，一项大型欧洲共识协调工作将CD 19、CD 20、CD 5、CD 23、κ和λ确定为诊断CLL的“必需”标志物。建议使用其他“推荐”标志物（CD 43、CD 79 b、CD 81、CD 200、CD 10和ROR 1），以改善具有非典型免疫表型的临界性CLL病例与其他小B细胞淋巴瘤/白血病的鉴别诊断。

表一基于世界卫生组织第5版更新分类的慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤诊断标准

CLL的特征性免疫表型特征在设计流式细胞术技术以评估可测量残留病（MRD）时非常有用。如果每 10，000 个正常白细胞中有 1 个白血病细胞（0.01%）的 CLL MRD 被认为是阳性的。前瞻性临床试验提供了大量证据，证明根除MRD的疗法可改善临床结果。在外周血和骨髓中，MRD 状态对 CLL 患者的无进展生存期和总生存期有很强的预后影响;沿着这些思路，无法检测到的MRD。外周血MRD评估有助于筛查和告知骨髓穿刺决策。例如，如果在血液中检测到MRD，则通常不需要骨髓穿刺。多色流式细胞术仍然是MRD评估应用最广泛的方法，因为它具有广泛的可用性，快速的周转时间，可靠地检测当前应用的MRD限值。

流式细胞术也常规用于评估CLL的预后标志物。ZAP-70、CD38 和 CD49d 的表达反映了 CLL 细胞的活化和增殖，并且往往与遗传标记相关，例如未突变的 IGHV 基因（Zap-70、CD38）和 12/NOTCH 三体突变（CD49d）。

表2 用于检测慢性淋巴细胞白血病可测量残留病的选定多参数流式细胞术组合

免疫组织化学

CLL/SLL的免疫组织化学染色显示出与上述流式细胞术相同的特征性免疫表型。通常，CD20 的表达是暗淡和部分的，而其他 B 细胞标志物，如 CD19、PAX5 和 CD79a，由肿瘤淋巴细胞强烈表达。因此，建议在处理CLL / SLL的新生或后处理病例时进行2个B细胞标记。LEF1 是一种有用的诊断标志物，因为它在高达 95% 的 CLL 中强烈弥漫表达，在其他小 B 细胞淋巴瘤中通常为阴性。与CD5一样，LEF1是一种T细胞标志物，但由CLL / SLL中的B细胞和T细胞表达。最后，细胞周期蛋白D1和SOX11免疫染色也是帮助排除套细胞淋巴瘤的有用工具，套细胞淋巴瘤是一种与CLL分离的独特CD51B细胞淋巴瘤。MYC 和 MUM1 有助于免疫组织化学染色，以突出增殖中心，常规进行 Ki67 以评估增殖增加。TP53 改变的患者经常表现出非典型形态学特征，包括淋巴细胞具有裂解/形状不规则的细胞核或外周血中的前淋巴细胞样/前淋巴细胞（前淋巴细胞）增加;淋巴结具有与上述组织学侵袭性病例对应的突出增殖中心;或骨髓和淋巴结中没有扩增增殖中心的中大型细胞数量增加（“副免疫母细胞变异型”）的病例。

分子检测

根据美国国家综合癌症网络指南，在CLL检查期间可以进行各种分子检测。目前，没有所谓的CLL特异性突变或遗传改变可以明确确定CLL的诊断。然而，一旦建立了CLL的诊断，分子检测在预后和治疗决策过程中发挥着越来越大的作用。评估 TP53和 IGHV 突变状态以及 IGHV3-21/IGLV3-21和 IGHV4-39基因使用的分子研究越来越有助于指导治疗决策。此外，BTK，PLCG2和 BCL2突变状态可能有助于制定靶向治疗的背景下治疗策略。在 Richter 转化的背景下，Richter 转化与潜在/先前 CLL 的克隆相关性（通过分子方法）已被证明具有预后意义。

通过荧光原位杂交和常规核型进行细胞遗传学分析

最初可能需要通过 FISH 进行细胞遗传学检测，以帮助确诊 CLL 并将其与套细胞淋巴瘤区分开来；在这种情况下，如果无法进行细胞周期蛋白 D1 免疫染色，则 FISH 检测 CCND1 易位状态可能会有所帮助。一旦确诊 CLL，建议进行以下细胞遗传学分析，以获得预后信息并指导治疗：针对 del(17p)、del(11q)、12 三体和 del(13q) 以及 CpG- 的 FISH刺激中期核型。约 80% 未经治疗的 CLL 存在细胞遗传学异常，其中 del(13q) 是最常见的发现。独立的 del(13q) 与良好的预后相关。del(17p)、del(11q) 或复杂核型（超过 1 个细胞中有 3 个不相关的染色体异常）的存在通常与不利风险类别。Del(17p) 通常与剩余 TP53 等位基因的突变相关，这可以通过测序研究检测到。在治疗期间，如果患者对治疗没有反应和/或表现出疾病进展（包括进展为 DLBCL），则除了进行 del(17p) 检测外，还应进行 FISH 检测 del(17p)。鉴于细胞遗传学分析的结果仍然具有临床相关性，在适当的临床背景下，它通常被纳入 CLL 患者的检查中。

研究结论

多学科技术评估，包括流式细胞术、免疫组织化学、分子和细胞遗传学分析，可以全面描述患者白血病的诊断特征，并确定重要的预后和治疗生物标志物。随着技术的进步提高了这些方法评估 CLL 的能力，还有许多需要学习的地方。除了发现新的生物标志物和治疗靶点之外，一些研究者提出了将来研究方向，包括 CLL 是克隆多样性的，由异质肿瘤细胞群组成，甚至在个体患者中；因此，技术进步允许更多地了解亚克隆群体在患者中的潜在临床重要性可能变得越来越相关。同样，考虑到 CLL 中微环境的不断发展的作用，研究特定疾病区室（例如淋巴结与外周血与骨髓）的意义也值得探索。

参考文献

1. Geyer JT, Kluk MJ. Current Landscape of Ancillary Diagnostic Testing in Chronic Lymphocytic Leukemia. Surg Pathol Clin. 2023 Jun;16(2):411-421. doi: 10.1016/j.path.2023.01.012. Epub 2023 Mar 8. PMID: 37149366.
声明：材料由阿斯利康支持，仅供医疗卫生专业人士参考
审批编号：CN-120638

责任编辑：肿瘤资讯-Amiee
排版编辑：肿瘤资讯-宋淇榕

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