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【文献精读】慢性淋巴细胞白血病的细胞外囊泡：肿瘤微环境信使作为新靶向治疗的基础？

2023年08月23日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

摘要：本期【文献精读】慢性淋巴细胞白血病的细胞外囊泡：肿瘤微环境信使作为新靶向治疗的基础内容进行了整理，与读者分享。

EV概述

EV是已知在生理和病理条件下介导局部和远处微环境中的细胞间通讯的小囊泡。它们携带多种蛋白质、代谢物、DNA、RNA、微小RNA（miRNA）和长的非编码RNA，并分泌在生物体液（尿液、血液、腹水和脑脊液）中。

基于MISEV 2018，EV被定义为具有双层脂质膜的无核颗粒，它们由细胞外空间中的细胞释放。EV最初分为两大类：1.外泌体（EXO）是通过内体成熟、多泡体（MVB）的形成、腔内囊泡以及 MVB 与质膜融合产生的 30-150 nm 囊泡。EXO的分泌由运输（ESCRT）机器所需的内体分选复合物调节。因此，一些常见的EXO标志物包括ESCRT蛋白，如Tsg101和Alix。Tetraspanins CD9，CD81和CD63也是最受欢迎的EXO标志物之一。2.微囊泡（MV）（以前称为外泌体或微粒）是由质膜起泡产生的150-1000nm囊泡。

关于EV在CLL和其他恶性肿瘤中的研究文章，大多数研究与EXO有关。

CLL EVs及其在 TME 中的作用

CLL EVs 对 CLL 具有诊断和预后价值。EVs 分泌到血液中有助于 CLL 的进展。因此，通过靶向EVs，期望破坏 CLL-TME 的相互作用并增加癌症治疗的有效性。

图1 EVs在慢性淋巴细胞白血病中的调节作用。多泡体与质膜的融合或质膜的出芽导致 CLL B 细胞释放 CLL EV。EV 的释放可以通过刺激 BCR （B 细胞受体），TLR （Toll 样受体）信号传导或 CD40/IL-4（左图）重演的 TME （肿瘤微环境）信号来增加。CLL EVs的拥有属性是接触特定的表面标记（右图）。与正常 B 细胞 EV 相比，CLL EV 含有更高水平的 LYN，SYK，MAPK 和 BCL2 mRNA，以及更高水平的 miR-150，miR-155和 miR-29，但是 miR-223的水平较低。TME 刺激增加其 miR-363含量（BTK-Bruton 酪氨酸激酶； LYN-Lck/Yes 新型酪氨酸激酶； SYK-脾酪氨酸激酶）。

尽管体外增殖率低，但CLL患者的B细胞在这种情况下会自发释放MV和EXO。此外，CLL患者的血浆或血清EV水平高于健康对照组。同样，其他血液系统恶性肿瘤患者的EV PB水平异常高。EV释放可以通过刺激或阻断TME信号来调节（图1）。血液EV水平可能不仅反映BCR激活/抑制，还反映肿瘤细胞计数和治疗诱导的细胞死亡水平。已有研究证明了BCR激活与体外和体内EV释放之间的联系。因此，有必要进一步调查EV参与抗BCR治疗的情况。CLL-TME相互作用的其他介质的激活也可以影响EV分泌。TME 的 EV 释放的三种诱导剂（即 BCR 激活、CD40/IL-4 刺激和 TLR 刺激）集中在 NF-κB 通路上。

通过转移包括蛋白质，非编码 RNA 和代谢物在内的各种分子，CAF-EV 可以通过调节肿瘤细胞的增殖，其传播形成转移和抗肿瘤免疫应答来影响不同水平的肿瘤过程CAF 衍生的 EV 也可以调节肿瘤对治疗的反应。因此，CLL EVs激活基质细胞，并导致他们分化成 CAF。这些活化细胞分泌的 EV 为 CLL 细胞提供存活信号，这种囊泡依赖于 LYN 激酶。MSC 衍生的 EVs 不仅通过诱导抗凋亡蛋白的表达而且通过诱导细胞迁移，耐药性和 BCR 信号激活来保护 CLL 细胞免于自发性凋亡。因此，基质细胞 EV 可能是 BCR 激活和 CLL EV 囊泡释放之间建立的相关性的触发因素。来自 CLL 患者 MSCs 的 EXO 比来自健康患者 MSCs 的 EXO 更强烈地诱导 CLL 细胞迁移和基因表达。

由 CLL 细胞传递的 EV 可以影响免疫细胞，从而导致免疫抑制和肿瘤免疫逃逸。，CLL 细胞的囊泡释放可受多种因素调节。

Evs在CLL中的临床意义

1.EV谱作为CLL中的生物标志物
虽然CLL患者的循环EV计数高于健康对照组，但它也与Rai分期明显相关，因此是疾病进展的标志。高 EV 计数与晚期疾病以及预后不良和生存率差的其他标志物相关;因此，它构成了一个独立的预后因素。
非编码RNA（包括miRNA）是CLL进展的关键调节因子，是疾病进展和治疗反应的宝贵生物标志物。RNA被包装在循环的EXO内，因此可以防止核糖核酸酶降解。此外，循环EV的miRNA谱似乎与起源细胞的miRNA谱有很大不同，也将为有效的预后因素之一。2.干扰免疫治疗
鉴于传播到TME中的运输物质分子种类繁多，CLL EVs不仅有助于疾病进展，而且还阻碍了CLL的治疗。最近两项关于抗CD19嵌合抗原受体（CAR）-T细胞疗法的研究表明，CLL可以破坏免疫突触，并导致CAR-Ts衰竭、代谢静止甚至裂解。这些发现可能解释了在临床上观察到的CAR-T细胞治疗失败。研究人员还证明了CLLEVs表面存在几种不同的IC（包括PD-L1），并认为这可能解释了CLL中CAR-T细胞疗法和抗PD-1 / PD-L1疗法的失败。在EV上检测到的各种IC可能会在针对单个IC时相互补偿。此外，PD-L1在EV表面上的暴露可能与细胞表面PD-L1竞争抗PD-L1抗体。同样，EV上B细胞表面标志物的表面呈递会干扰免疫治疗。使用EV开发新的治疗策略或优化当前的CLL治疗确实具有一定的前景，但仍存在一些挑战。为了适用于临床，基于EVs的疗法将需要高通量技术来生产和纯化大量标准化的EVs制剂，而不会产生脱靶效应。

研究结论

首先，EV释放的强度和EV含量的性质可能成为CLL进展和治疗反应的生物标志物。循环EVs是实体瘤特别相关的诊断和预后生物标志物，因为血液样本比组织活检的侵入性更小。循环EVs对于B细胞恶性肿瘤（如CLL）的诊断和预后仍然值得探究。在CLL中，主要的预后因素是临床观察、IGHV突变状态和遗传异常。EV计数和EV含量的性质（特别是miR-155）与CLL进展、BCR激活和TME的整体激活相关从而构成CLL的有价值的生物标志物。

其次，EVs积极参与CLL细胞和TME之间的对话，从而为肿瘤细胞提供免疫保护和生存优势。阻止CLL EV运输将构成一种新的治疗选择或目前CLL治疗的辅助手段。

最后，用于治疗癌症的EV工程技术的快速发展，靶向治疗将有希望，例如CLL药物的EV封装和EV表达CLL特异性蛋白，在CLL B细胞表面表达的分子在CLL EV上的存在可能影响CLL治疗。设计EVs来表达TME细胞表面也存在的分子；由此产生的竞争过程可能抑制肿瘤TME通讯，从而阻碍疾病进展。另一方面考虑，EV靶向治疗也可能对患者不利；例如，外泌体CD20和PD-L1分别中和抗CD20治疗和CD19-CAR-T细胞。IC在EV表面的呈递阻碍了抗肿瘤免疫反应。
总之，当考虑 CLL EV 所发挥的大量活动及其在 TME 串扰，治疗反应和耐药性发展中的作用时，针对这些囊泡可能开辟新的治疗方法。需要进行补充性的研究，但是将基于 EV 的方法与目前可用的 CLL 治疗相结合将有助于优化治疗结果并提高患者的生活质量。

参考文献

Dubois K, Tannoury M, Bauvois B, Susin SA, Garnier D. Extracellular Vesicles in Chronic Lymphocytic Leukemia: Tumor Microenvironment Messengers as a Basis for New Targeted Therapies? Cancers (Basel). 2023 Apr 14;15(8):2307. doi: 10.3390/cancers15082307. PMID: 37190234; PMCID: PMC10137283.

声明：材料由阿斯利康支持，仅供医疗卫生专业人士参考

审批编号—CN-120636

责任编辑：肿瘤资讯-Amiee
排版编辑：肿瘤资讯-宋淇榕

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