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【中国之声】单细胞转录组学描述CD7 CAR-T治疗的免疫稳态细胞水平动态，为R/R T - ALL/LBL患者的治疗提供新见解

2023年08月19日

编译：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

近期，北京航空航天大学于健教授团队、陈伟副教授团队及北京高博博仁医院克晓燕、胡凯主任团队联合进行了一项I期临床试验，旨在探究靶向CD7的嵌合抗原受体T（CAR-T）治疗的安全性和疗效，并将最新研究成果发表于Clinical Cancer Research杂志。
这项I期研究发现在接受CD7 CAR - T治疗的急性T淋巴细胞白血病（T–ALL）/ T淋巴母细胞性淋巴瘤（T-LBL）患者中，CD7+正常T细胞减少，CD7- T细胞扩增，该研究结果为临床医生提供了复发/难治性（R/R） T–ALL / LBL的治疗最佳决策的新见解。

研究设计

该研究是一项开放标签、I期临床试验（ChiCTR2200058969），旨在评估供体来源的CD7 CAR - T细胞治疗7例R / R T – ALL / LBL患者的安全性和疗效。采用流式细胞仪和聚合酶链式反应（PCR）检测CAR - T细胞。采用流式细胞小球微阵列术定量细胞因子水平。采用ScRNA - seq分析免疫重建。

该研究的主要终点是评估CD7 CAR – T细胞治疗至多28天的安全性，次要终点为CD7 CAR-T 治疗患者的疗效和总生存期（OS）、药代动力学（PK）和药代学参数（PD）。

研究结果

安全性结果

细胞因子释放综合征（CRS）和免疫效应细胞相关神经毒性（ICANS）的发生率分别为85.7%（n = 6）和14.3%（n = 1）。仅1例患者（病例2）发生3级CRS和严重的4级ICANS。其他5例患者发生1级CRS，其他全部患者无ICANS。CRS发病的中位时间为第5天（范围：1~19）。所有患者的CRS中位持续时间为8天（范围：5~21天）。

仅2例（28.6%）患者发生移植物抗宿主病（GVHD）。病例1在CAR - T细胞输注后第6个月发生1级肠道慢性GVHD（cGVHD），经醋酸强的松和芦可替尼治疗后消退，评估与CAR - T治疗无关。病例4在CAR - T细胞输注后第3个月发生3级肠道急性GVHD（aGVHD），认为是肠道感染所致，最终于第4个月死于肠道aGVHD。

所有患者入组前血细胞指标正常。CAR – T相关的4级血液学不良事件（AE）包括：在6例（85.7%）患者中观察到白细胞减少、血小板减少、中性粒细胞减少；其中5/6例（83.3%）患者发生4级中性粒细胞减少；5/5例（100%）患者发生4级白细胞减少。6/7例（85.7%）患者发生血小板减少，其中4/6例（66.7%）患者为4级血小板减少，且血小板减少时间延长，直到截止日期才恢复血小板。至4级白细胞减少、中性粒细胞减少、血小板减少的中位时间分别为7（范围：0~21）天、4（范围：1~21）天、7（范围：0~30）天。

5例（71.4%）患者发生感染。4例（57.1%）患者发生病毒激活，3例（42.9%）患者发生细菌感染。未观察到真菌感染。

疗效结果

第28天，入组时无BM受累的4例T - LBL患者实现完全缓解（CR），有BM受累的T – ALL患者实现微小残留疾病（MRD）阴性CR（图1）。

图1.缓解情况

至数据截止时，4例患者仍然存活。中位无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）分别为4个月和4.6个月（图2）。

图2.OS和PFS结果

CAR-T细胞扩增和持久性，淋巴细胞亚组重建

采用流式细胞术和PCR检测血液中CAR - T细胞扩增情况。CAR - T细胞在第11天至第15天达到峰值，FCM检测到的平均数量为51.1个细胞/uL（范围：7.17~497）。2例患者（病例2和7）的CAR - T细胞在第3个月时无法被FCM检测到，而其他5例患者的CAR - T细胞在最终PCR检测评估前仍可检测到。但CAR - T细胞输注3个月后，所有患者的CAR - T细胞拷贝数都相对较低（图3）。

图3. 血液中CAR - T细胞扩增情况

大多数患者在CAR - T细胞反应过程中，血清白细胞介素 – 6（IL – 6）、白细胞介素 – 10（IL – 10）、肿瘤坏死因子 – α（TNF – α）、干扰素 – γ（IFN – γ）、可溶性CD25（sCD25）等生物标志物轻度升高，提示CAR - T细胞输注后活化（图4）。

图4.血清中生物标志物情况

CAR - T细胞治疗对T细胞组成的影响

根据FCM（图5A - C）和PET - CT（图5D）分析，病例4（T - ALL）和病例5（T - LBL）分别在输注后达到CR，但不幸的是，患者在大约4个月后死于严重感染。病例6（T – ALL）在输注后实现短期CR，但在第3个月复发（图5E - G）。1例患者（病例1，T – LBL）在CAR - T治疗12个月后实现长期CR，直到复发（图5H）。

图5. CAR-T细胞输注前后的代表性图像

来自9个样本的61,757个细胞被聚成11个细胞群，包括4个髓系细胞群、5个T细胞群、1个NK细胞群和1个B细胞群（图6A，B）。CAR - T治疗后短时间内的PBMC样品显示MKI67+ T细胞比例显著增加（P=0.049，K - S检验，图6C)，表明CD7 CAR - T清除恶性和正常T细胞后，T细胞增殖立即激活。此外，该研究还观察到CD16+ T细胞显著增加（P=0.049）（图6C）。为了进一步评估治疗前后T细胞的组成变化，该研究以更高的分辨率重新聚类T细胞，并鉴定出14个亚群（图6D）。通过比较治疗后样本中CD7+宿主T细胞比例与GZMK+和CD16+ α / β CAR - T细胞比例，发现两者呈显著负相关（R = -0.920，P=0.0399）（图6F）。治疗后GZMH+ T细胞最多（20.4% ~ 48.7%），仅占对照2组T细胞的的7%；此外，观察到这三例患者的CD4+原始T细胞在治疗后均下降了3倍以上（图6E）。

图6.CAR - T细胞治疗对T细胞组成的影响

CD7- T细胞免疫功能的评价

几乎在所有T细胞亚型中，除了病例5中的CD4+原始T细胞中的T细胞激活途径外，三个基因集[T细胞受体（TCRs）的表达水平、T细胞激活途径和T细胞受体信号通路]在治疗后样本中表现出相同或更高的表达水平（图7A）。该研究进一步构建通路网络，探索强化通路之间的隐藏关系（图7B）。如图7C所示，CD7 - T细胞在治疗后表现出明显的红斑狼疮相关功能的激活。

图7.CD7+和CD7- T细胞的功能差异

免疫细胞与感染的关系

在病例4和病例5中发现单核细胞数量大幅减少（图8A）。为了测试CD7 CAR - T治疗后单核细胞损失的可能解释，该研究进一步对CD14+单核细胞进行了详细分析，这些细胞可分为8个亚群，其中第4群在输注前的病例6中比例最高，治疗后无感染，单核细胞无变化（图8B，8C）。cytoTRACE预测该亚群是分化程度最低的（图8D）。与发展潜能呈正相关的基因在抗原加工功能上的表达比例过高，而与发展潜能负相关的基因在白细胞分化和激活功能上的表达比例较高（图8E、F）。发展潜力与AP - 1呈负相关（JUN和FOSB，图8E）。

图8. 免疫细胞与感染的关系

T细胞表达谱与T - ALL /LBL复发的关系

因此，S100A8、S100A9和LYZ被认为是潜在的通用复发标志物，无论治疗策略如何，因为其在每种亚型T细胞的复发样本中都有显著上调（图9A）。如图9B所示，S100A8、S100A9和LYZ在B细胞和NK细胞中也有相似的表达谱，说明这三个基因的上调可能是从淋巴祖细胞开始的。

图9.T - ALL复发相关标志物的表达谱

研究结论

综上所述，该研究提供了患者经CD7 CAR-T治疗的免疫稳态细胞水平动态，这对R / R T – ALL / LBL的治疗决策具有一定的价值。但CD7 CAR-T输注后重建CD7 - T细胞的TCR多样性检测及单核细胞丢失机制值得进一步研究。

作者介绍

克晓燕

主任医师, 医学博士，博导

北京大学第三医院血液科主任医师, 二级教授，博导
北京大学医学部血液学系副主任
北京博仁医院成人淋巴瘤科首席顾问
中国女医师协会常务理事
中国女医师协会靶向治疗委员会主任委员
中国女医师协会血液学会名誉主任委员
中国老年协会血液肿瘤委员会副主委员
中国医药教育协会血液学专业委员会副主任委员
中国抗癌协会淋巴瘤专委会常委
中华医学会北京分会肿瘤专业委员会委员
中华医学会血液学会淋巴瘤学组委员
中国实验血液学会等多个协会委员
《白血病淋巴瘤杂志》副主编，多家杂志编委
卫生部、北京市医疗技术鉴定咨询专家；
中央保健会诊专家

胡凯

主任医师，医学博士

北京高博博仁医院成人淋巴瘤/骨髓瘤科主任
中国老年学学会老年肿瘤专业委员会委员；
北京医学会市级“枢纽型”社会组织专家委员；
北京围手术期医学研究会血液专业委员会委员；
中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会第一届中国T细胞淋巴瘤工作组委员；
中国健康管理协会健康科普专业委员会委员；
中国医药教育协会造血干细胞移植及细胞治疗专业委员会委员；
北京肿瘤协会临床研究专业委员会委员；
北京市医学会血液委员会青年委员
参与20余项国际、国内多中心临床研究；第一作者及通信作者发表中英文论文30 余篇；参编参译著作5本；多次在国内外学术会议（美国血液学年会、欧洲血液学年会）汇报团队研究成果。

参考文献

Wei Chen, et al. Single-cell transcriptomics reveals immune reconstitution in R / R T - ALL / LBL patients with donor - derived CD7 CAR - T therapy. Clin Cancer Res. 2023 Feb 3; CCR - 22 - 2924.

责任编辑：Luna
排版编辑：Luna

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