徐医附院细胞研究和转化医学中心副主任
徐医附院血液科科副主任，淋巴瘤病区主任
中华医学会血液学分会淋巴细胞疾病学组委员
中国抗癌协会淋巴瘤专委会委员
中国EBV相关疾病工作组秘书长
中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会青年委员
中国抗癌协会血液肿瘤委员会慢淋工作组委员
中国抗癌协会第一届T细胞淋巴瘤工作组委员
中国老年医学会血液学分会淋巴瘤学组委员
江苏省淋巴瘤联盟副主席
江苏省医学会血液学分会淋巴瘤/骨髓瘤学组委员
江苏省“六大人才高峰”培养对象
江苏省“科教强卫工程”青年医学人才
徐州医科大学附属医院血液内科2019级硕士研究生
研究背景
弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）约占非霍奇金淋巴瘤（NHL）的40%，在临床表现、病理特征、细胞起源、分子遗传学及预后等方面具有高度异质性，经一线免疫化疗后仍有40%的患者复发难治。CD5 阳性弥漫大B细胞淋巴瘤（CD5+ DLBCL）占所有DLBCL的10%，临床表现为高度侵袭性，老年化、分期晚、伴随B症状、多发结外病变、伴有骨髓和中枢受累。免疫组化多为Non-GCB亚型，伴MYC, BCL-2、MYC/BCL-2等分子的高表达。研究发现CD5+DLBCL与CD5-DLBCL基因表达谱存在明显差异，CD5+ DLBCL与ABC DLBCL的基因谱有重叠。当前以利妥昔单抗为基础的免疫化疗、强化免疫治疗以及挽救性自体或异体移植等均不能改善其预后。
研究目的
CD5阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤（CD5+ DLBCL）在现今免疫化疗时代预后较差。准确的基因的分型和预后分层有助于针对性的个体化治疗。因此，亟需阐明 CD5+ DLBCL的临床病理和分子遗传特征，以准确的评估预后和提供更好的治疗策略。
研究方法
收集2014年1月至2018年5月来自淮海淋巴瘤协作组（HHLWG）的7家医疗机构的771例初诊DLBCL临床资料和随访数据。通过计算样本量确定61例CD5阳性和60例CD5阴性患者。通过NanoString技术分析55例DLBCL样本中mRNA基因表达水平差异，Lymph2Cx聚类法用于确定细胞起源（COO）。利用二代外显子测序技术（NGS）对基因芯片的 DNA 拷贝数分析，以确定基因突变及遗传亚型。SPSS及Graphpad 软件用于比较两组临床病理特征及预后分析。卡方检验或Mann-Whitney U 检验比较两组的临床病理特征，Log-rank检验和Cox 比例风险模型用于生存分析。
结果
与CD5- DLBCL 相比，CD5+ DLBCL的临床特征为发病年龄大、Ann Arbor分期（III/IV期）、伴随B症状，国际预后指数评分（IPI）及美国国家综合癌症网络-IPI（NCCN-IPI）高，中枢神经系统（CNS）受累发生率较高。病理上，高表达MYC、MYC/BCL-2、P53和Ki-67（P<0.05），同时伴有BCL-6、CD10等蛋白的低表达（P<0.05，表1）。
注: ECOG PS ECOG体能评分系统, LDH 乳酸脱氢酶, IPI 国际预后指数, NCCN国家综合癌症网络, BM骨髓, CNS中枢, HBV乙肝病毒，Non-GCB非生发中心亚型根据免疫组织化学和Lymph2Cx检测结果，在CD5+ DLBCL 患者中，39/61例（64.0%）患者为非生发中心B细胞样（non-GCB）亚型，17/27例（62.9%）患者为活化B细胞样（ABC）亚型（P<0.05，图1）。
图1. 基于NanoString技术的相关基因表达差异热图及其细胞起源分型：A示Lymph2Cx 模型以及基因表达热图，图B示CD5+和CD5-DLBCL之间细胞起源的差异分布情况
二代测序结果显示，CD5+ DLBCL中基因突变频次较高的前4位基因依次是：PIMI（67%）、MYD88（63%）、CD79B（50%）、KMT2D（41.7%），CD5- DLBCL中基因突变率较高的前4位基因依次为DUSP2（48%）、SOCS1（30%）、TBL1XR1（30%）、BTG2（26%）。CD5+ DLBCL组中MCD亚型的比例高于CD5- DLBCL组（54.2% vs. 13.0%，P = 0.005，图2）。
图2. 基于二代测序 (NGS) 的 CD5+ 和 CD5- DLBCL 遗传亚型分析：图A突变热图显示了 47 个 样本中最常发生改变的基因，图B示CD5阳性和CD5阴性组之间的遗传亚型分布，分别为 MCD、BN2、N1、EZB。
生存分析显示CD5+ DLBCL和CD5-DLBCL患者的5年总生存（OS）率分别为：39.0%和79%（P < 0.001），5年无进展生存期（PFS）分别为0和70.9%。亚组生存分析显示：不论细胞来源、 MYC/BCL-2、P53 和 BCL-6 蛋白表达状态如何，CD5阳性组中两组的OS和PFS差异均无统计学意义（P > 0.05，图3）。
图3. CD5+ 和 CD5- DLBCL 中 COO 和生物标志物的预后意义:CD5联合细胞起源（IHC）和其他免疫组化标志物对预后的影响：A图示CD5阳性/Non-GCB,CD5阳性/GCB,CD5-/Non-GCB,CD5-GCB四组的OS和PFS差异;B图示不同CD5与MYC/BCL-2双表达情况四组的OS和PFS差异;C图示不同CD5和BCL-6蛋白表达情况的OS和PFS差异；D图示同CD5和P53蛋白表达情况的OS和PFS差异
多因素分析结果显示，年龄 > 76 岁、Ann Arbor分期（III/IV期）、乳酸脱氢酶与上限比值（LDH-R）>1.1是OS的独立影响因素，而影响PFS的独立预后因素则是年龄>76岁、Ann Arbor分期（III/IV期）、LDH-R>1.1、CNS受累和低白蛋白血症。
结论
CD5+ DLBCL临床侵袭性强，易发生CNS等结外组织侵犯,伴随MYC、MYC/BCL-2和P53高表达；分子基因水平层面以PIMI、MYD88、CD79B基因突变以及ABC 和 MCD 亚型为特征；患者预后较差，且独立于细胞来源、MYC/BCL-2、P53 和 BCL-6等蛋白表达水平，多因素分析得出年龄、Ann Arbor分期、LDH-R、CNS受累和低蛋白血症是独立的预后因子。
作者：马瑜晗 桑威
单位：徐州医科大学附属医院血液科淋巴瘤中心
来源：American Journal of Surgical Pathology,2022
doi: 10.1097/PAS.0000000000001957.
苏公网安备32059002004080号
