在非小细胞肺癌领域，MET 14外显子跳跃突变是近来备受关注的驱动基因突变之一，是筛选MET TKI靶向治疗获益人群的重要分子标志物。为更好地了解MET通路以及MET 14外显子跳跃突变的检测手段，【肿瘤资讯】特别邀请到苏州大学附属第一医院的郭凌川教授进行专题分享。
苏州大学附属第一医院病理科主任
中华医学会病理学分会委员
江苏省医学会病理学分会主任委员
中华医学会病理学分会淋巴瘤专业学组副组长
中国临床肿瘤学会（CSCO）肿瘤病理专委会常委
中国医疗保健国际交流促进会病理专委会常委
中国病理学工作者委员会常务委员
中国医学装备协会病理装备分会常务委员
中国医学装备协会病理诊断部副部长
江苏省医师协会病理分会副会长
江苏省病理质控中心副主任
江苏省抗癌协会病理学分会副主任委员
中华医学会病理学分会分子病理学组委员
中国抗癌协会淋巴瘤专委会委员
中国抗癌协会乳腺病理学组委员
走近MET通路
MET信号通路是c-MET蛋白与肝细胞生长因子（HGF）在胞外特异性结合，促进c-MET蛋白二聚化，从而激活下游信号通路包括MAPK、PI3K、STAT、NF-κB等，对细胞的增殖、生长、迁移和侵袭起到重要的调控功能[1]。在正常情况下，MET通路在胚胎形成、肝脏再生、伤口愈合等生理功能上发挥着重要作用[2]。
MET基因异常主要有以下4种表现形式，一是MET 14外显子跳跃突变，二是MET基因扩增，三是MET激酶域突变和MET融合，四是MET蛋白过表达[3,4]。
在我国非小细胞肺癌患者中，MET 14外显子跳跃突变发生率很低，仅为0.9%~1.7%[5,6]。MET 14外显子跳跃突变是独立的驱动基因。多个注册临床研究数据显示，酪氨酸激酶抑制剂（TKI）在MET 14外显子跳跃突变的晚期非小细胞肺癌患者中表现出良好的抗肿瘤活性及安全性[7-11]。目前，国内外已有针对MET 14外显子跳跃突变的靶向药物获批上市。但对于MET 14外显子跳跃突变的人群而言，分子检测及免疫组化的精准诊断是治疗的前提。
MET 14外显子跳跃突变致病机制
MET 14外显子跳跃突变是MET信使RNA (mRNA)中的14号外显子丢失的一个现象，通常由RNA剪接异常所造成。在正常的MET信号通路中，MET蛋白通过E3泛素连接酶介导的泛素化降解进行相互调控。而MET 14外显子跳跃突变导致c-MET蛋白含有E3泛素连接酶c-Cbl结合位点的近膜结构域缺失，进而使c-MET蛋白泛素化障碍及降解率降低，增加c-MET蛋白的稳定性，引起下游信号的持续激活，从而诱发肿瘤[6]。
在非小细胞肺癌中，MET 14外显子跳跃突变发生率为1%~3%，在肺肉瘤样癌（PSC）人群中比较常见，发生率可高达31.8%[6]。MET 14外显子跳跃突变通常不与EGFR、ALK、ROS1等常见驱动基因突变同时存在，其常见于老年、晚期疾病患者，预后不佳。
MET 14外显子跳跃突变检测
关于MET 14外显子跳跃突变的检测方法临床常用基于DNA水平的NGS（二代测序）和基于RNA水平的NGS以及RT-qPCR方法进行检测[12]。3种检测方法的特点如下：
1）DNA-NGS：大规模靶向测序panel，是目前用于检测MET 14外显子跳跃突变最常用的手段，样本保存方便，检测效率高，可以同时筛查多个基因突变。
2）RNA-NGS：仅需少量RNA就可以对MET 14外显子跳跃突变进行定量分析，能够同时筛查多个基因的多重突变。
3）RT-qPCR：以mRNA为模板，逆转录之后通过实时荧光定量PCR，检测MET 14外显子跳跃突变，特异性高，检测速度快。
RNA-NGS与RT-qPCR均可提高MET 14外显子跳跃突变的检出率，但其对样本具有更高的要求。
DNA-NGS检测MET 14外显子跳跃突变可能存在漏检
基于DNA的NGS检测是一种间接检测方法，如果检测区域未覆盖所有检测区域就会出现漏检情况。由于MET 14外显子跳跃突变的突变位置和突变类型多样化，基于DNA水平的NGS检测方法，不同的建库方法检测能力有一定的差别[13]。建议建库的靶向序列至少应覆盖全部的MET 13内含子、MET 14外显子及MET 14外显子下游的50个碱基对范围。MET14号还包括其侧翼内含子，NGS持续性分析的数据应尽可能包含全面的MET 14号跳突位点的信息，并建议定期进行更新。
MET 14外显子跳跃突变亦可从RNA水平进行检测
基于RNA的NGS是一种直接检测方法，检出率高，对于样本的质量要求也高[14-15]，检测全程需要更好地做好病理和分子的质控。研究结果显示，基于RNA水平的NGS与基于DNA水平的NGS具有很好的一致性，其可高达96.1%[16]。
基于RNA水平的另一检测方法即RT-qPCR，在检测MET 14外显子跳跃突变时灵敏度和特异性均非常高。RT-qPCR对比NGS检测结果发现，RT-qPCR灵敏度为100%，特异性为97.4%[13,17]，这意味着RT-qPCR与NGS检测有着较高的一致性。
高质量RNA测序依赖于高质量的RNA样本，因为组织离体后，RNA极易发生降解，样本高质量的标准化前处理是保障高质量RNA质量的关键。研究显示，肿瘤组织离体10分钟、20分钟、30分钟时，核糖体RNA(rRNA)比率仍≥1.5，RNA完整性指数(RIN）≥6.0，但离体40分钟后RNA会出现明显降解，质量达不到测序要求，抽提总量也明显下降[18]。因此，在RNA离体后要尽快抽离出来加以冻存。
优选组织样本，液体样本可做补充
手术切除的肿瘤组织一直是指南推荐的用于检测转移性非小细胞肺癌生物标记物的金标准。在进行MET 14外显子跳跃突变检测时，优选组织样本，当组织样本和细胞样本不可及的时候，可以考虑液体活检样本进行补充检测[19]。VISION研究[20]显示，组织和液体活检患者的ORR相似，提示两种检测均可指导患者MET TKI的治疗，但组织活检阳性率更高。
小结
1）MET14外显子跳跃突变是非小细胞肺癌的驱动基因突变之一，是筛选MET TKI靶向治疗获益人群的重要分子标志物。
2) 国内外指南和共识均推荐MET 14外显子跳跃突变作为非小细胞肺癌患者的常规基因检测内容[12，21，22]。
3）目前用于检测MET 14外显子跳跃突变的方法主要包括基于DNA的NGS、基于RNA的NGS和RT-qPCR。检测时，优先推荐组织活检，液体活检可作为补充。
[1]Bouattour M, et al. Hepatology. 2018 Mar;67(3):1132-1149.
[2]WU YL, et al. Cancer Treat Rev. 2017 Dec;61:70-81.
[3]Recondo G, et al. Cancer Discov. 2020 Jul;10(7):922-934.
[4]Subramanian J, et al. Expert Rev Anticancer Ther. 2021 Aug;21(8):877-886.
[5]Liu SY,et al. J Thorac Oncol. 2016;11(9):1503-1510.
[6]尹利梅,等.中国肺癌杂志. 2018;21(7):553-559.
[7]Guo R,et al. Nat Rev Clin Oncol. 2020 Sep;17(9):569-587.
[8]Recondo G, et al. Cancer Discov. 2020 Jul;10(7):922-934.
[9]Lai GGY,et al. J Clin Oncol. 2019 Apr 10;37(11):876-884.
[10]Li XM, et al. Clin Lung Cancer. 2020 Nov17;S1525-7304(20)30334-X.
[11]Wang Y, et al. Lung Cancer. 2018;118:105-110.
[12]中华医学会病理学分会,等.中华病理学杂志.2021,50(04):323-332.
[13]Awad MM，et al. J Clin Oncol. 2016 Mar 1;34(7):721-730.
[14]Drilon A, et al. J Thorac Oncol. 2017 Jan;12(1):15-26.
[15]Davies KD, et al. J Thorac Oncol. 2019;14(4):737-741.
[16]Li Y, et al. Lung Cancer. 2018 Aug;122:113-119.
[17]Kim EK, et al. Clin Lung Cancer. 2019;20(1):e123-e132.
[18]梁烨,等.中华病理学杂志.2018,47(6) : 467-468.
[19]Salgia R, et al. Cancer Treat Rev. 2020;87:102022.
[20]Hiroshi Sakai, et al.Jpn J Clin Oncol.. 2021 Aug 1;51(8):1261-1268.
[21]NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology (NCCN Guidelines). Non-Small Cell Lung Cancer. v1 2022.
[22]CSCO非小细胞诊疗指南2021版.
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过期日期：2022-8-24
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