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【2022 EHA中国之声】中国医学科学院血液病医院关于骨髓增生性肿瘤的2项最新研究入选Oral

2022年05月21日

编译：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

备受瞩目的第27届欧洲血液学协会年会（EHA），将于2022年6月9日至12日在奥地利维也纳以线上+线下的形式举行。EHA大会涵盖了血液学研究的各个方面，与全球血液学领域的专家学者共同探讨和分享有关血液学的创新理念及宣传最新的科学和临床研究结果。在本届大会上，有越来越多中国的科研成果将与全球的血液学专家见面。【肿瘤资讯】特此整理了来自中国医学科学院血液病医院的两项最新研究：“具有新型抗原结合域的CD123-CD33复合CAR-T细胞为急性髓系白血病的治疗提供了一种新的方法“及“骨髓增生性肿瘤中通过EGR1-TNFA轴介导的炎症和纤维细胞生成的ASXL1突变加速骨髓纤维化”。

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题目：具有新型抗原结合域的CD123-CD33复合CAR-T细胞为急性髓系白血病的治疗提供了一种新的方法

摘要编号：S121

研究背景

CAR-T治疗后抗原逃逸介导的复发是导致应答不持久的重要机制，因此需要优化CAR-T疗法来治疗髓系恶性肿瘤。同时靶向CD33和CD123几乎可以覆盖所有急性髓系白血病（AML）患者。CD123 CAR-T和CD33 CAR-T的脱靶细胞毒性，尤其是对HSPCs的脱靶细胞毒性一直受到关注。既往有研究人员对这一问题进行了探讨，但不同研究的结论不一致。

研究目的

本研究旨在改善复发和/或难治性AML的预后，探索CD123-CD33 CAR-T对造血功能的影响。

研究方法

研究者使用杂交瘤技术开发了一组抗CD123单克隆抗体(mAb)，命名为6E11、8D7、12H7和13 C3，并将四种scFvs中的每一种掺入4-1BB/CD3ζ信号域中，生成4个第二代CAR。用慢病毒上清感染T细胞，生成CAR-T细胞。从CAR蛋白的表达特性、体内外抗白血病疗效等方面进行比较分析，筛选出最佳候选CD123 CAR。接下来，研究者以复合方式生成了CD123-CD33双靶向CAR。研究者建立了一个逃逸模拟模型来探索化合物CAR-T是否可以降低与抗原丢失相关的复发风险。联合应用流式细胞仪分析、CFU检测和单细胞RNA测序方法，探索CD123-CD33 CAR-T对造血的影响。

研究结果

CD123 CAR结构与四种不同的新型scFvs在CAR蛋白表达比率上存在差异。除8D7 CAR-T外，3个CAR-T细胞组均观察到CAR蛋白从遇到靶细胞后下降到上升的变化趋势，从基本和动态表达的角度来看，13 C3 CAR是最适合的构建体。不同scFvs的123CAR-T细胞在体外和体外介导了可变的抗白血病作用。

123CAR和33CAR蛋白在化合物CAR-T细胞表面有效表达，无需密码子优化。化合物CAR-T在治疗抗原逃逸小鼠模型中显示出优越性。

FCM分析显示NCT细胞组与复合CAR-T组残余CD34+ 细胞比例差异无统计学意义。scRNA-seq分析显示，各组中未分化最多的HSC群几乎没有变化。GSEA发现CAR-T组HSC群体在静止、细胞周期、G2M检查点相关基因的富集上与NCT组无差异。此外，与NCT组相比，化合物CAR-T组未见TGF-β信号通路/PI3K-AKT-mTOR信号通路下调/富集。CFU试验证明，化合物CAR-T治疗组仍有相当数量的造血集落形成。

研究结论

在本研究中，研究者在4种新型抗CD123 mAb的基础上，开发了一组具有新型scFvs的第二代CD123 CAR。研究证明scFv序列在最初和动态上对CAR表达均有显著影响，并进一步影响CAR-T功能，阐述了scFv开发在CAR-T治疗细化中的重要性。研究中的化合物CAR-T最大限度地降低了抗原丢失介导的逃逸的风险。值得注意的是，未经密码子优化的cCAR野生型DNA序列不会带来免疫原性并发症等潜在风险。scRNA-seq和CFU检测令人信服地证明CD123-CD33化合物CAR-T对造血的毒性有限。因此，CD123-CD33化合物CAR-T与新型scFvs为R/R AML患者提供了新的希望。

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题目：骨髓增生性肿瘤中通过EGR1-TNFA轴介导的炎症和纤维细胞生成的ASXL1突变加速骨髓纤维化

摘要编号：S190

研究背景

除了活化JAK/STAT信号通路的核心作用，ASXL1突变是骨髓增殖性肿瘤(MPN)中最常见的额外突变，在骨髓纤维化(MF)中的发生率远高于原发性血小板增多症(ET)和真性红细胞增多症(PV)患者。然而，与ASXL1突变和骨髓(BM)纤维化相关的机制仍不清楚。

研究目的

研究ASXL1突变在MF加速中的作用，并探讨其潜在机制。

研究方法

研究者研究了本院连续302例MF患者的临床资料。对于小鼠模型研究，使用Vav1-Cre小鼠、Asxl1^flox/flox和Jak2^V617F/+ 敲入等位基因达到造血细胞特异性Jak2^V617F/+/Asxl1^flox/flox(Asxl1-/-Jak2^VF)、Jak2^V617F/+(Jak2^VF)和Asxl1^flox/flox(Asxl1-/-)小鼠。利用测序(ATAC-Seq)和染色质免疫沉淀(ChIP)-Seq对RNAseq、转座酶可及染色质进行整合分析，探索潜在机制。

研究结果

302例患者中有98例(32.5%)携带ASXL1突变。ASXL1突变与单核细胞计数较高、外周血(PB)CD34⁺细胞增加、脾脏体积较大和MF分级较高相关。与临床结果一致，与Jak2^VF小鼠相比，Asxl1-/-Jak2^VF小鼠显示PB中血小板计数较低、单核细胞计数和c-kit⁺细胞较高。造血干祖细胞(HSPCs)区室分析显示，与Jak2^V617F小鼠相比，Asxl1-/-Jak2^VF小鼠脾脏中粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMPs)和巨核细胞/红系祖细胞(MEPs)增加，而BM中未增加（图1A），与Asxl1-/-Jak2^VF小鼠脾脏重量增加一致（图1B）。组织学分析显示Asxl1-/-Jak2^VF小鼠骨髓中有网硬蛋白浸润，而其他年龄匹配的基因型无网硬蛋白浸润。

ASXL1^MT MF患者和Asxl1-/-Jak2^VF小鼠均显示BM中单核细胞/巨噬细胞增加（图1 C-D），解释了ASXL1^MT MF患者和小鼠模型中更严重的炎症。体外分化实验发现Asxl1-/-Jak2^VF HSPCs存在单核/巨噬细胞分化偏倚（图1E）。在纤维化驱动细胞分析中，与ASXL1^WT MF患者相比，ASXL1^MT MF患者显示间充质基质细胞(MSCs)来源的肌成纤维细胞相当，而BM中单核细胞来源的纤维细胞增加（图1F）。体外纤维细胞分化试验（图1G）和流式细胞仪分析证实，与其他基因型相比，Asxl1-/-Jak2^VF小鼠BM中纤维细胞增加。

机制上，Jak2^VF HSPCs中Asxl1缺失导致多梳组(PcG)靶基因的增强子激活，如Egr1（图1H）。Egr1的上调，在小鼠模型和患者中得到验证（图1I-J），反过来解释了HSPCs对单核/巨噬细胞系承诺的增加（图1K）。而且，Egr1诱导Tnfa的活化（图1L），从而进一步驱动单核细胞向纤维细胞的分化（图1M）。因此，在Asxl1-/-Jak2^VF小鼠和ASXL1^MT MF患者中，TNFR拮抗剂(R-7050)联合芦可替尼可显著减少体外纤维细胞生成（图1N-O）。

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图1 研究结果

研究结论

本研究说明了ASXL1突变在MPN表型和骨髓纤维化中的关键作用。ASXL1突变激活MPN中的EGR1-TNFA轴，导致单核/巨噬细胞介导的炎症和纤维细胞诱导的骨髓纤维化。芦可替尼联合TNFR拮抗剂可改善纤维细胞，为抗纤维化治疗提供了一种有吸引力的理论方法。

参考文献

1. Zhenzhen Wang, Yang LU, et al. CD123-CD33 COMPOUND CAR-T CELLS WITH NOVEL ANTIGEN BINDING DOMAINS PROVIDE A NEW HOPE FOR THE TREATMENT OF ACUTE MYELOID LEUKEMIA.

https://library.ehaweb.org/eha/2022/eha2022-congress/356985/zhenzhen.wang.cd123-cd33.compound.car-t.cells.with.novel.antigen.binding.html?f=listing%3D0%2Abrowseby%3D8%2Asortby%3D1%2Asearch%3Ds121

2. Z. Shi，J. Liu，et al. ASXL1 MUTATIONS ACCELERATE BONE MARROW FIBROSIS VIA EGR1-TNFA AXIS MEDIATED INFLAMMATION AND FIBROCYTE GENERATION IN MYELOPROLIFERATIVE NEOPLASMS.

https://library.ehaweb.org/eha/2022/eha2022-congress/357054/zhongxun.shi.asxl1.mutations.accelerate.bone.marrow.fibrosis.via.egr1-tnfa.html?f=listing%3D0%2Abrowseby%3D8%2Asortby%3D1%2Asearch%3Ds190

责任编辑：Jenny
排版编辑：Jenny