审校与点评：赵翔宇
2021年新冠疫情在全球范围内持续存在，但人们追求学术的脚步从未停歇。2021年6月9日-6月17日，全球最重要的血液年会之一——第26届欧洲血液病协会（EHA）年会将以虚拟会议的模式召开。本次EHA年会共有1700余项研究的最新成果公布。大会摘要一经发布，【肿瘤咨询】特邀请到北京大学人民医院赵翔宇教授，就NK细胞治疗临床前研究进行了筛选与点评，内容如下。
研究员、副教授、主治医师、博士生导师
北京大学血液病研究所所长助理
北京青年五四奖章
北京市科技新星
北京市青年拔尖人才
第十、十一届北京市青年联合会委员（2012-）
中华医学会血液学分会青年委员会副主任委员（2020-）
中国研究型医院学会细胞研究与治疗专业委员常委兼秘书长（2016-）
中国医药教育协会白血病分会副主任委员（2019-）
美国血液学会员（2019-）
中华血液学杂志编委（2020-）
主持国家/部级基金10余项，第一作者/通讯作者发表中英文论文48篇
基因工程编辑IPSC来源NK细胞有望成为治疗B细胞恶性淋巴瘤的有前景的临床药物
标题：GENETICALLY ENGINEERED IPSC-DERIVED NK CELLS AS A PROMISING CLINICAL DRUG CANDIDATE FOR THE TREATMENT OF B CELL MALIGNANT LYMPHOMA
摘要号： PB1542
作者：Yanan Yue, Xiaobin Song, Yixuan Zhou, Weihong Xu, Juan Xiong, Lingling Song, Jiajia Wu, Jing Xu, Qi Zhang, Zhen Tian, Lihong Shen, Yuan Lu, Gang Li, Lei Le, Meng Yang, Xiangjun He, Yongchao Zhang, Yiyun Wang, Yongxian Hu, Siyuan Tan, Yangbin Gao, He Huang, Luhan Yang
单位：Qihan Biotech，Hangzhou，China；The First Affiliated Hospital,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou,China
研究背景
嵌合抗原受体(CARs)是合成的跨膜受体，设计用于靶向肿瘤相关抗原以治疗人类恶性肿瘤。CARs已被用于重定向T细胞和NK细胞显示出对几种血液学肿瘤的特异性及显著临床反应。尽管自体CAR修饰的T细胞具有抗肿瘤活性，但仍有许多局限性，包括临床安全性和制造困难。与T细胞不同，同种异体NK细胞不会引起GvHD，并且可以安全给药，无需人类白细胞抗原完全匹配。这消除了为每位患者生产独特的、针对特定患者的CAR产品的需要。自然杀伤细胞的一个主要优势是它们天然是“现成的”，可以集中制造，因此产品可以按需提供并随时可用。
研究目的
iPSC，由于其易于基因工程改造，体外无限扩张能力和分化成NK细胞的可行性，是生产治疗性NK产品的有吸引力的起始细胞资源。
研究方法
通过工程化一群iPSC，然后进行单细胞衍生克隆扩增和筛选，可以实现对iPSC的广泛基因改造。由此产生的iPSC克隆携带同质基因成分，可用作下游制造的主细胞库。
研究结果
该研究报道了NK019细胞的一些特征，NK019细胞是一种基因工程iPSC来源的NK细胞治疗候选细胞。NK019细胞由携带3种转基因的修饰人iPSC单细胞克隆分化而来，包括靶向CD19的嵌合抗原受体(CAR)、修饰的CD16和IL15分子。这3个转基因在从iPSC分化为NK细胞前后保持稳定表达。此外，NK019细胞表现出典型的NK细胞特征，具有CD19靶特异性细胞毒性、增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和组成性激活的IL15信号。此外，NK019细胞在RajiNCG小鼠模型中也显示出有体内抗肿瘤活性。
结论
该研究设计了iPSC衍生的NK细胞有望成为治疗B细胞恶性淋巴瘤的临床药物候选药物。
骨髓归巢受体 CXCR4 基因工程编辑的 NK 细胞过继回输后改善白血病细胞的清除
标题：IMPROVED LEUKEMIA CLEARANCE AFTER ADOPTIVE TRANSFER OF NK CELLS ENGINEERED WITH THE BONE MARROW HOMING RECEPTOR CXCR4
摘要号： EP718
作者：Mélanie Lambert, Filip Segerberg, Agneta Andersson, Richard Childs, Mattias Carlsten
单位：Department of Medicine,Huddinge,Karolinska Institutet,Huddinge,Sweden；Cellular and Molecular Therapeutics Branch,National Heart,Lung,and Blood Institute,National Institutes of Health,Bethesda,United States
研究背景
急性髓系白血病（AML）总体存活率仍然较差。需要新的治疗方案。早期临床试验强调，过继性回输自然杀伤细胞（NK）可以诱导复发/难治性AML和高风险骨髓增生异常综合征（MDS）患者的缓解。最近的进步使研究人员能够探索基因工程NK细胞的潜力，以提高疗效。
研究目的
主要目的是研究体外扩增的人NK细胞是否可以用于改善体内白血病的清除。体外扩增的NK细胞被设计为过表达功能性骨髓(BM)归巢受体CXCR4R334X。此外，我们还通过敲除CXCR4基因，进一步探讨了CXCR4/sdf-1⍺轴在NK细胞骨髓归巢中的作用。
研究方法
应用4D-NucleofectorTM系统(LONZA)将编码CXCR4R334X的mRNA或CRISPR/Cas9介导的CXCR4基因敲除(KO)的RNP复合物导入体外扩增的人NK细胞。Q-RT-PCR检测CXCR4的RNA转录水平；流式细胞仪检测细胞表面CXCR4的表达。用ddPCR评价KO疗效。采用CD107a脱颗粒实验和钙调素-AM杀伤实验评价电穿孔后靶向性白血病的体外效应。体外迁移采用跨孔迁移实验，NSG-SGM3小鼠用于体内迁移能力评估。在NK细胞治疗前，将MOLM-14细胞接种于NSG-SMG3小鼠的骨内，以评估其体内抗白血病的潜能。
研究结果
该研究证明了体外扩增的人NK细胞，mRNA转染过表达功能性骨髓归巢趋化因子受体CXCR4R334X，在体内对骨髓间隔室有更高的归巢倾向，导致过继输注到AML荷瘤小鼠比对照NK细胞显著改善白血病排斥反应。此外，研究的数据显示，CXCR4R334XmRNA转染的NK细胞更有效地延缓了白血病扩散到未接种肿瘤的骨髓间室。重要的是，本研究中使用的CRISPR/Cas9或mRNA转染方法都不影响NK细胞靶向AML细胞的能力。
结论
结这些数据初步提示利用人类NK细胞基因工程来促进NK细胞归巢到骨髓可以进一步提高基于NK细胞的免疫疗法对髓系白血病的疗效。
探索一种安全有效现货型、非照射CARNK-92MI细胞免疫疗法治疗多发性骨髓瘤
标题：EXPLORING A SAFE AND EFFECTIVE 'OFF-THE-SHELF' CELL-BASED IMMUNOTHERAPY FOR THE TREATMENT OF MULTIPLE MYELOMA USING NON-IRRADIATED CAR NK-92MI CELLS
摘要号：EP721
作者：Elena Maroto-Martín, Jessica Encinas, Almudena García-Ortiz, Eva Castellano, Laura Ugalde, Rafael Alonso, Alejandra Leivas, Mari Liz Paciello, Vanesa Garrido, Beatriz Martín-Antonio, Guillermo Suñe, Teresa Cedena, Daniel J. Powell Jr., Paula Río, Joaquín Martinez-Lopez, Antonio Valeri
单位：Hospital Universitario 12 de Octubre,CNIO,H12O-CNIO Hematological Malignancies Clinical Research Group,CIBERONC,Madrid,Spain；CIEMAT/CIBERER,Hematopoietic Innovative Therapies Division,IIS-JD,Madrid,Spain
研究背景
CAR-NK细胞代表一种比CAR-T细胞更安全的方法。没有移植抗宿主病，可以实现"现货型"策略。NK-92是一种通用的、廉价的、快速获得的细胞疗法，以前用于临床试验。虽然在多发性骨髓瘤（MM）中报告了对这些细胞的适度反应，但通过基因改造可以增强细胞毒性潜力。
研究目的
研究的目的是为产生无风险和有效的CAR NK-92MI免疫疗法治疗MM。
研究方法
NK-92MI细胞分别用含有相同4-1BB共刺激结构域的单个第二代CAR、NKG2D-CAR或BCMA-CAR以及具有不同共刺激物组合的双BCMA-NKG2D CAR进行慢病毒转导。Car NK-92MI iCasp9-CD19是通过逆转录病毒转导获得的，其结构为SFG iCasp9.2A. ΔCD19。经FACS分选纯化后，获得稳定的修饰细胞系，并用qPCR检测载体拷贝数以确保CAR的表达相似。体外细胞毒试验包括靶配体高表达和低表达以及CRISPR-Cas9系统产生的BCMA基因敲除的MM细胞系：U266、BCMAhigh和NKG2DLhigh；ARP-1、BCMAdim和NKG2DLdim；XG-1、BCMAhigh和NKG2DLlow；U266bcmaKO、BCMAKO和NKG2DLlow。体内：静脉注射5×106个CAR NK-92MI细胞。每周一次，连续三周。
研究结果
与原代细胞系相比，该研究发现CAR NK-92MI细胞具有特异性、无毒性和较高的体外抗肿瘤活性。此外，该研究注意到两种CARS的联合表达没有表现出协同作用，但在体外对MM细胞株的细胞毒作用范围明显扩大。在活体MM原位异种移植小鼠模型实验中表明，临床上使用的辐射剂量完全消除了该研究治疗方案中这种“现成”免疫疗法的效果。降低辐射剂量(2.5～3.75Gy)对肿瘤消除没有影响，并导致动物早期NK-92MI诱导死亡(图1A-B)。为了解决这些缺点，已经产生了表达自杀基因治疗的CAR NK-92心肌梗死细胞(99.8%纯度，图1C)，并且已经证明，在利米度胺(AP1903)诱导下，细胞可以在体外被迅速消除。这一策略将确保免疫治疗的抗肿瘤有效性和安全性，并且所有产生的效应器在体外显示出与CAR NK-92MI类似的细胞毒活性。活体实验正在进行中。
结论
该研究已经产生了简单和组合稳定的CAR NK-92MI细胞，其提高了原代细胞系的细胞毒性活性。两者的共表达导致了针对不同多发性骨髓瘤靶标的细胞毒性覆盖。在体内，这些数据表明，在该研究的多发性骨髓瘤模型中，放疗并不能增强NK-92 CAR治疗抗肿瘤效果，还需要与iCasp9安全开关结合，以确保治疗的安全性和有效性。
排版编辑：Amiee
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