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【2020ASH·中国之声】张晓辉教授团队：异基因移植后人巨细胞病毒感染抑制巨核细胞发育及血小板生成的机制

2020年11月18日

来源：国家血液临床医学研究中心

2020年新型冠状病毒肺炎疫情全球肆虐，尽管如此，疫情并未阻挡学术的进步与传递。众多期待中，第62届美国血液学年会（ASH）将于2020年12月5日~8日以线上形式召开。11月10日北京时间22:00，ASH摘要上线，多项重磅研究公布。其中，国家血液系统疾病临床医学研究中心，北京大学血液病研究所数项研究成果入选ASH口头发言，即将在国际舞台上发出响亮的声音。

题目：733 Human Cytomegalovirus Selectively Suppresses the Megakaryo/Thrombopoiesis of PDGFR+ and αvβ3+ Megakaryocytes Via the TPO/c-Mpl Pathway after Allo-HSCT

汇报时间：2020年12月7日，星期一：下午2:15

秒懂要点

1. 巨细胞病毒感染影响巨核细胞成熟、凋亡及血小板生成全过程；

2. 病毒感染相关受体PDGFR和αVβ3高表达可能作为巨细胞病毒感染的预测因素和治疗靶点；

3. 本研究为病毒感染引起的血小板减少症的治疗研究提供思路和理论支持；

4. 2020美国血液学年会口头发言。

通讯作者

张晓辉

主任医师

国家血液系统疾病临床医学研究中心副主任 (兼)办公室主任
北京大学血液病研究所副所长
中华医学会血液学分会(第十一届) 副主任委员、造血干细胞移植学组组长
中国免疫学会血液免疫分会第四届委员会副主任委员
中国抗白血病联盟副主任委员
中国医药教育学会止血与血栓分会副主任委员
Blood 杂志中文版，《国际输血与血液学杂志》副主编
《中华血液学杂志》,《临床血液学杂志》,《临床内科学》等编委
临床研究方向: 造血干细胞移植治疗血液病和出凝血疾患。

第一作者

刘凤琪

博士研究生

国家血液系统疾病临床医学研究中心，北京大学人民医院，北京大学血液病研究所，博士研究生，导师：张晓辉教授
研究方向：造血干细胞移植与出凝血
以第一作者和共同第一作者发表SCI论文2篇，申请国家发明专利3项
2018年ASH大会壁报交流，2020年ASH大会发言

移植后巨细胞病毒感染引起血小板症减少机制不明

病毒感染引起的血小板减少症是免疫缺陷宿主的常见严重并发症。异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）患者移植后巨细胞病毒（CMV）感染发生率高，可损伤多种靶器官并引起血液系统并发症，影响患者长期生存。由于目前对病毒-宿主间相互作用机制研究尚不清晰，尽管抗病毒治疗手段多样，CMV感染仍然是移植后患者早期的重要死亡原因。为了解决这一关键问题，本研究旨在探索CMV的易感因素及靶向治疗方法，探究CMV感染对巨核细胞发育及血小板生成过程的影响，包括血小板生成素及其受体（TPO/c-Mpl），寻找CMV易感的巨核细胞亚群和新的治疗靶点。

巨细胞病毒感染影响巨核细胞成熟、凋亡及血小板生成全过程

本研究纳入40例异基因造血干细胞移植患者，其中18例为CMV DNA血症患者，22例检测血清CMV DNA阴性。采用流式细胞术检测患者骨髓巨核细胞表面CD41、vWF、pp65、c-Mpl、PDGFR、αVβ3和TLR2的表达情况。聚合酶链反应（PCR）检测巨核细胞内CMV DNA水平。体外巨核细胞由正常CD34+造血干细胞通过TPO诱导分化形成，加入病毒血清感染后，透射电子显微镜观察CMV感染巨核细胞后细胞内的病毒衣壳。巨核细胞凋亡水平通过Annexin V法检测，碘化丙啶（PI）标记核酸并结合流式细胞术检测倍体。

研究发现，在CMV DNA血症患者中， CMV标志蛋白pp65阳性巨核细胞占40.59±6.12%。同时，pp65阳性巨核细胞表面αVβ3、PDGFR和TLR2受体表达水平高于pp65阴性巨核细胞。对40例患者临床资料的多因素分析结果提示，PDGFR+αvβ3+巨核细胞比例是CMV感染的独立危险因素(p = 0.008)。CMV感染患者体内巨核细胞的凋亡和坏死较对照组均有所增加，且巨核细胞的倍体分布模式发生改变，在8N时达到峰值，16N以上多倍体比例明显降低。另外，研究发现，CMV感染患者中pp65阳性巨核细胞表面TPO受体c-Mpl的表达减低，但是血清TPO水平较对照组升高。

为进一步验证这些结论，研究者在体外诱导CD34+干细胞来源的巨核细胞，加入CMV病毒阳性血清进行培养。培养9天后，利用电镜观察，在巨核细胞胞核内发现了病毒颗粒（Figure 1A），提示CMV直接感染巨核细胞。研究进一步检测了巨核细胞的凋亡及倍体水平，发现CMV感染后巨核细胞凋亡增加，倍体分布向低倍体偏移，并且培养上清检测血小板释放明显减少，巨核细胞表面c-Mpl表达减低。为验证CMV易感性，在体外CMV感染巨核细胞培养体系中，分别加入αVβ3、PDGFR和TLR2受体的抑制剂，研究发现加入αVβ3抑制剂和PDGFR特异性单抗IMC-3G3后显著抑制了CMV感染巨核细胞（Figure 1B），而PDGFR的非特异性抑制剂格列卫（Gleevec）和TLR2抑制剂则对CMV感染率无明显影响。

本研究为病毒感染引起的血小板减少症的治疗研究提供思路和理论支持

CMV感染所致巨核细胞成熟障碍及血小板生成减少，是由于病毒感染下调TPO受体c-Mpl表达，高表达PDGFR及αVβ3受体的巨核细胞为CMV易感细胞亚群，而其受体拮抗剂可能为治疗移植后CMV相关的血小板减少提供理论依据。

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资料来源

https://ash.confex.com/ash/2020/webprogram/Paper137115.html

责任编辑：Flora
排版编辑：Flora

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