点评：张会来 天津医科大学肿瘤医院
第61届美国血液学会（ASH）年会将于2019年12月7-10日在美国奥兰多隆重举行。该会议是血液病领域首屈一指的学术会议，汇集了全球血液病临床和研究科学家，共同探讨血液病领域的新技术、新进展。大会召开之前，【肿瘤资讯】特邀请天津医科大学肿瘤医院张会来教授及崔尧丽博士对本次大会霍奇金淋巴瘤相关的重要研究进展进行了编译与点评，详细内容如下。
现任天津医科大学肿瘤医院淋巴瘤内科主任
主要研究方向：恶性淋巴瘤的分子诊断和个体化治疗
主要协会/学会任职：
中国抗癌协会（CACA）淋巴瘤专业委员会副主任委员
中国临床肿瘤学会（CSCO）抗淋巴瘤联盟常委
中国医疗保健国际交流促进会肿瘤内科分会副主任委员
中国老年保健协会淋巴瘤专业委员会副主任委员
中华医学会肿瘤分会淋巴瘤学组委员
天津市抗癌协会淋巴瘤专业委员会主任委员
天津市血液病质控中心副主任委员
天津市医师协会血液医师分会副会长
天津医科大学肿瘤医院淋巴瘤内科
Oral131：Longitudinal Assessment of Circulating Tumor Mutational Burden Using a Next-Generation Sequencing Cancer Gene Panel: A Potential Biomarker of Response to Programmed Cell Death 1 (PD-1) Blockade in Patients with Relapsed/Refractory Classical Hodgkin Lymphoma
研究背景
在复发难治的经典型霍奇金淋巴瘤中PD-1单克隆抗体nivolumab和pembrolizumab的有效率超过70%，但对于那部分对PD-1无应答或应答后出现反弹的患者是否对PD-1产生耐药目前尚缺乏有效的监测指标。我们假设循环肿瘤DNA是否可以作为一个监测指标。
研究方法
21例复发难治的经典型霍奇金淋巴瘤（中位年龄 32岁；19～51岁），平均接受过5线治疗（范围3～7），包括自体干细胞移植（77%）、brentuximab vedotin（100%）、PD-1治疗。采用CAPP-Seq进行血样分析，对血浆中ctDNA和外周血单核细胞（PBMC）中的DNA进行分析, 后者用于滤掉胚系突变。采用含有133个基因（320kb)的全外显子和剪切位点组成的基因panel,对样本进行靶向深度测序，这些基因在B细胞淋巴瘤中高频突变。利用Nextseq 500 platform(illumine)建立文库。测序深度平均大于2000x,覆盖80%靶向区域，灵敏度高达3*103,采用VarScan2软件进行生物信息学分析。
研究结果
患者平均接受了26周期的PD-1抑制剂治疗（9～63c），9例（42%）获得了CR, 6例（29%）获得了PR,6例（29%）PD。血浆和PBMC在治疗前、每5个周期治疗后和末次治疗后采集，获得PR的患者疾病控制期持续了4.5～24个月后病情发生了进展。基线分析中18个患者进行分析结果显示，可评估患者的突变基因和突变平均数分别为7.3 ±5.1（范围：2～22）和9.9 ±8.4（范围：2～37），在20%以上R/RcHL中，患者反复出现一些基因的非同义突变，这些基因包括STAT6(45%)、SOCS1(40%)、ITPKB(35%)、GNA13(35%)、TP53(20%)、TNFAIP3(15%)。9例获得了CR,在基线的时没有发现明显的DNA突变和PD-1抑制剂耐药间的相关性。DNA突变主要涉及JAK-STAT ,NF-KB,PI3K-AKT,NOTCH，免疫逃逸信号通路。PD组患者ctDNA单倍体基因组当量为592.2hGE/ml（范围：2～2746）,与CR组相比明显升高（P=0.0437)。与基线相比，第5周期ctDNA明显下降（592.2vs.67，P0.0008),随后CR患者hGE/ml进一步下降（至14 P=0.05），PD患者进一步升高（至1300 P=0.1）。第5周期时，基线时的DNA突变在所有的CR/PR患者均消失，完全被新的克隆取代。与之形成鲜明对比的是，PD患者在第5周期时，基线时的DNA突变仍持续存在。4例PD-1抑制剂耐药的患者与TP53突变相关。虽然此文不讨论ctDNA与PET-CT之间的相关性，但克隆重塑和克隆持续存在的模式与PET-CT的结果间存在相关性。
结论
ctDNA分析可以检测R/RcHL中的肿瘤特异性突变，对这些患者的ctDNA突变进行追踪可以对应用PD-1抑制剂治疗R/RcHL是敏感（克隆重塑）或是抵抗（克隆持续）进行鉴别。
Oral658：Beyond Exhaustion: The PDL1-PD1 Axis Shapes the Classical Hodgkin Lymphoma Microenvironment
研究背景
PD-1抑制剂治疗经典霍奇金淋巴瘤（cHL）的疗效被认为与T细胞耗竭相关，然而目前仍缺乏直接证据。PD-1的表达并不能预测PD-1抑制剂治疗经典霍奇金淋巴瘤的疗效。除此之外，PD-1和PD-L1的表达并不能独立预测预后，这也表明存在更复杂的机制。
研究目的
研究经典霍奇金淋巴瘤中PD-1和PD-L1的关系。
研究方法
采用免疫组化IHC的方法对149例经典型霍奇金淋巴瘤和27例淋巴结反应性增生（RLN）进行PD-1表达的研究。采用多重荧光免疫组织化学法mIHC及成像质谱流式（IMC）等方法对47例cHL和27例RLN进行分析。KMH2和L428细胞系和健康供者的TH细胞进行共培养分析。
研究结果
研究发现PD-L1阳性的cHL细胞被PD-L1阳性的巨噬细胞包围，免疫组化证实了进一步的深度表型分布CD14+CD16-CD163-PDL1+-,CD14-CD68+CD163-PDL1+,CD14+CD16+CD163+PDL-1-髓系亚型。我们的数据支持cHL可以招募和诱导PDL-1+的髓系环境。文章进一步研究了T细胞耗竭的相关证据，免疫组化发现经典霍奇金淋巴瘤中PD-1的表达明显低于淋巴结反应性增生者（p<0.001）,同时共表达的TIM3、LAG3也明显下降，共表达TBET和EOMES并没有明显下降。数据表明，淋巴结反应性增生组没有发现有T细胞的耗竭且PD-1和PD-L1的表达没有相关性。同时也发现T细胞产生IL2/IFNγ的能力在无论有无应用Penbrolizumab或其类似物的cHL和RLN患者中无有意义的差异。对照组没有发现T细胞的耗竭存在且PD-1和PD-L1的表达没有相关性。虽然T细胞耗竭不存在，但并不能排除PD-1和PD-L1轴在其中的作用，它可以调控T细胞的归巢，包括移动、分化、TReq的效应功能。PD-1表达的短暂作用并不像T细胞耗竭那样持久。与PD-1表达相比，cHL的PD-L1和MHC2表达能够预测PD-1抑制剂的疗效。MHC2表达表明了Th细胞的抗原递呈作用。因此我们进一步研究了PD-L1Th细胞的关系，对cHL细胞系和原代Th细胞共培养后研究发现实验组出现可以上调CD25hiCD127loFOXP3+Treg的富集，对照组为CD3/28TReq的表达（p<0.001）。F0XP3+细胞在cHL中富集（p<0.001）与PD-1不同，F0XP3与cHL的MHC2的表达相关（p=0.012）,也与PD-L1的表达相关（p=0.02）, PD-L1是一个强有力的预测因子，无论PD-1的表达如何，PD-L1在重塑肿瘤微环境中都起重要作用。
研究结论
研究发现CHL细胞和PD-L1+髓系环境的存在相关性，并未发现T细胞耗竭的证据。相反地，我们发现PD-L1表达可以重塑T细胞的分化，我们的数据对既往研究提出的PD-1抑制剂的反应和T细胞耗竭相关的观点形成了冲击，提示我们需要新的视角和分子生物学标记来进行进一步的研究。
张会来教授点评
经典型霍奇金淋巴瘤（cHL）是一种异质性复杂的生物学实体。早期的研究主要集中在RS细胞的特征，现在越来越认识到肿瘤微环境的重要性，因其可能影响发病机制、化疗敏感性及长期预后。与其他B淋巴细胞相比，经典霍奇金淋巴瘤表达高水平的免疫检查点受体 和LAG3，免疫检查点配体PD-L1和PD-L2。与普通的EB病毒感染相比，RS细胞感染EB病毒后会表达LMP1,进而通过NF-κB和JAK-STAT通路的激活而引起PD-L1表达而导致免疫抑制。HL独特的肿瘤微环境为CD30CAR-T细胞造成了屏障，CD30CAR-T细胞上PD-1的表达使这些细胞仍对肿瘤细胞上的PD-L1是敏感的，且表明CD30CAR-T细胞和免疫检查点之间的关系值得进一步研究。
HL中RS细胞通常只占淋巴组织细胞的1%左右，因其极其稀少对其研究收到了很大阻碍，且霍奇金淋巴瘤细胞系很难建立，因此对于RS细胞的分离需要从组织切片或细胞液中提取分离。最初的研究方法主要是候选基因法，早期的研究发现主要是NF-κB和JAK-STAT通路的激活，另一个基因测序发现的高频突变基因就是STAT6基因，近90%的HL病例显示JAK-STAT通路的基因改变。目前最具吸引力的发现HRS细胞突变的方法是对血浆中ctDNA的遗传分析，因其HRS细胞来源的DNA片段在患者诊断时可以被发现。ctDNA的靶向测序研究表明了该方法的可行性，比如，HL中STAT6基因突变的频繁发生。PD-1抑制剂在治疗cHL中有重要地位，上述文章对ctDNA在应用PD-1抑制剂治疗cHL的价值进行了研究发现ctDNA分析可以检测R/RcHL中的肿瘤特异性突变，对这些患者的ctDNA突变进行追踪可以对应用PD-1抑制剂治疗R/RcHL是敏感（克隆重塑）或是抵抗（克隆持续）进行鉴别，为我们进一步研究PD-1抑制剂治疗cHL提供了新的依据。
苏公网安备32059002004080号
