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【JTO】PD-L1免疫组化检测标准之争：孰优孰劣？

2017年02月20日

编译：阳明

来源：肿瘤资讯

抗PD－1/PD－L1药物的临床试验显示其临床疗效和免疫组化评估的 PD-L1的表达有关。已有的PD－L1检测方法多达四种，哪种方法有望成为未来PD－L1的金标准？这篇文章或许能给我们答案。

研究背景：

基于PD－1/PD－L1的免疫疗法在非小细胞肺癌中显示出了令人鼓舞的效果。目前，有三种药物——pembrolizumab，nivolumab和atezolizumab已经通过了美国FDA的审查，可以在进展期非小细胞肺癌患者中一线治疗失败后应用。第四种药物——durvalumab在非小细胞肺癌患者中的应用仍处于临床试验阶段。此外，pembrolizumab已经被FDA 批准用作进展期非小细胞肺癌的一线用药。

目前一药一诊断的共同开发模式使得这些治疗药物都同时伴有特定的免疫组化检测方法。其中两种已经被批准的用于非小细胞肺癌中的检测方法由Dako公司研发，并被优化用于Dako Link 48染色平台。另外两种方法（一种被批准，一种尚未）由Ventana BenchMark 平台研发。具体见表1.

表格1

多种检测方法带来了临床治疗决策的困难，对不同检测方法检测结果的一致性评估对于开展PD-L1相关临床试验至关重要。

蓝印程序化死亡配体1（Prgogrammed Death Ligand 1,PD-L1）免疫组化对比研究项目基于商业和学术的合作，旨在为临床试验中分析和对比四种PD-L1免疫组化检测方提供信息。该研究目前处于临床1期阶段，研究结果将为2期临床提供重要支持。

研究方法：

福尔马林固定，石蜡包埋的非小细胞肺癌患者的组织由独立的第三供应方提供。所有患者未接受过治疗相关的临床试验或免疫检查点抑制疗法。共纳入39例患者的样本，这些样本显示出了一系列的TC（tumor cell， TC）染色,IC(immune cell, IC)染色,以及TC结合IC染色。样本的分布并不代表临床试验中PD-L1表达的分布，样本的选择和组织学亚型，分期，年龄，性别以及其他因素无关。

表格2 蓝印项目：材料和技术流程

39例检测样本分别采用Dako（28－8，22C3）和 Ventana （SP142,SP263）各自的免疫组化检测方法。在PD-L1染色以外，还进行常规HE 染色以便确认病理医生对每一张切片的诊断。三个病理学家进行独立阅片，阅片的内容包括肿瘤细胞染色和免疫细胞（巨噬细胞淋巴细胞）染色。染色的比例采用半定量评分系统，染色的强度不在评估范围内。和治疗决策采用的标准一样，基于一个预先设定的阈值，并结合评分系统进行判断。本试验的阈值唯一，即对于28-8染色和22C3染色肿瘤细胞染色阈值为1%，对SP263染色阈值为25%。对于SP142染色而言，阈值为肿瘤细胞染色1%或PD-L1阳性淋巴细胞浸润肿瘤区1%。结合不同的检测方法和阈值临床诊断分类进行分析。

研究结果：

图1 基于每种检测方法和每个病例的肿瘤细胞和免疫细胞的染色比例分析对比

数据点代表了三个病理学家对每一例患者某种检测方法的判定的平均分数。叠加的点代表数值相同。没有采用临床的诊断阈值。四种检测方法的分数波动范围采用“最佳”颜色曲线进行对比分析。

图2：肿瘤细胞和免疫细胞的染色百分比

对肿瘤细胞和免疫细胞染色比例基于观察者的成对关联分析结果。每一个点代表不同的检测方法所对应的染色比例。以A 表中的第一个图为例，在图左上部分被圈住的红色三角形点，代表path－SP142 阅片医生判定22C染色肿瘤细胞比例为40%，28-8染色为30%。45度回归线代表相关性佳，重叠的回归线显示观察者之间的变异程度。

图3：不同临床阈值区间的比较

热图（A）和 Venn图（B）显示了基于不同检测方法和评分高于或低于临床阈值的诊断性PD-L1分类。图A 显示了检测方法／评分系统的结合。浅灰色代表低于各自的临床阈值，深灰色代表高于阈值。38例患者中有5例显示在低于阈值情况下的一致性，19例患者高于阈值表达的一致性，剩余的14例显示出不同的检测方法之间的不一致性。

表3：对比不同检测方法交换临床诊断阈值后的整体比例的一致性

图4：代表性的肿瘤染色情况

染色从阴性或弱到强的变化，5例具有代表性的非小细胞肺癌在20X放大的情况下PD-L1染色情况。22C,28-8和SP263检测方法在整体分布类型和肿瘤细胞覆盖方面结果较一致，而SP142染色的肿瘤细胞在大部分的病例中都相对较少。图A,B,C,D,E,F 和G依次显示了浸润免疫细胞从少到多的情况，同时也应注意到四种检测方法对于浸润免疫细胞的表达检测变异程度较大。

研究结论：

蓝印 PD-L1 免疫组化对比研究显示，四种PD-L1免疫检测方法中的三种在肿瘤细胞染色方面结果相近，第四种染色肿瘤细胞相对较少。所有的检测方法同时对免疫细胞进行了染色，但是不同检测方法的变异程度相比肿瘤细胞染色的变异程度较大。通过对比不同的检测方法和阈值，该研究显示，对于一部分病人而言，即便PD-L1的表达相似，但是检测方法和阈值的不同，也会导致对PD-L1表达状态的错误分类。对于特定治疗相关的PD-L1 的阈值的选取需要选择合适的可选检测方法以便提供更多信息。

参考文献：

Hirsch et al. Journal of Thoracic Oncology Vol. 12 No. 2

责任编辑：肿瘤资讯-Lilith