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系统性改造的TROP2靶向CAR-T细胞可克服TROP2 ADC耐药性，为实体瘤治疗提供新策略

04月09日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

TROP2 作为实体瘤重要治疗靶点，其靶向抗体药物偶联物（ADC）已在三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌等多种实体瘤中展现临床活性，但靶抗原下调、表位突变及化疗载荷耐药等问题，导致该类疗法难以实现持久应答，临床应用受限。同时，单一表位靶向的CAR-T细胞疗法也易因抗原逃逸产生耐药，为此研究团队系统性开发了TROP2靶向CAR-T细胞疗法，还依托全人源单域抗体技术构建双表位结合CAR-T细胞，通过多维度实验验证其抗瘤活性与抗耐药能力，为实体瘤治疗提供了全新的细胞治疗策略。

研究背景

TROP2的获得性耐药多由编码该蛋白的TACSTD2基因发生靶内突变导致抗原表达降低，或拓扑异构酶通路基因出现靶外突变引发化疗载荷耐药所介导，这也是限制其ADC类疗法临床获益的核心原因。而在EGFR突变型非小细胞肺癌中，即便EGFR-TKI联合化疗等一线方案提升了患者的无进展生存期和总生存期，晚期转移患者仍会出现疾病进展，且免疫检查点抑制剂也未在该类患者中展现明确获益，临床存在未被满足的治疗需求。此外，目前多数获批及临床阶段的CAR-T细胞疗法均为单一表位靶向设计，易因靶抗原下调或表位突变、丢失产生耐药，而靶向单一抗原两个不同表位的双表位CAR已被证实能提升疗效并减少抗原逃逸，如针对BCMA的cilta-cel，这也为TROP2靶向CAR-T细胞的研发提供了新的设计思路。

研究方法

研究团队采用PC9、HCC827GR6、MDA-MB-231等多种细胞系，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TROP2敲除及突变细胞系；从外周血单个核细胞（PBMC）中分离T细胞，经激活后转导CAR慢病毒，构建TROP2靶向CAR-T细胞。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术、蛋白质免疫印迹（Western blot）等方法进行抗体及CAR的鉴定，采用荧光素酶法、Incucyte活细胞成像、3D基质胶实验评估CAR-T细胞的细胞毒性。

体内实验选用NOD/SCID gamma（NSG）小鼠，构建皮下移植瘤、尾静脉转移瘤及患者来源异种移植（PDX）模型，评估CAR-T细胞的体内抗肿瘤疗效。利用分子操作环境（MOE）软件开展TROP2与抗体结合剂的结构建模及蛋白对接分析，并通过LEGEND plex ELISA检测CAR-T细胞的细胞因子释放情况，采用t检验、方差分析（ANOVA）等统计学方法进行数据处理与分析。

研究结果

TROP2靶向CAR-T细胞对实体瘤的体内外疗效

第二代CAR-T细胞在体外对TROP2阳性的PC9细胞系（EGFR外显子19缺失非小细胞肺癌）、HCC70细胞系（三阴性乳腺癌）具有显著杀伤活性，而TROP2敲除后，该杀伤活性完全消失，证实了其靶向杀伤的特异性。该CAR-T细胞对EGFR抑制剂耐药的HCC827GR6细胞，以及携带EGFR T790M/C797S突变的PC9细胞（奥希替尼耐药），也能维持较高的细胞毒性。

体内实验中，单次输注TROP2靶向CAR-T细胞，可使PC9、HCC827GR6细胞构建的小鼠皮下移植瘤显著消退，治疗应答可持续至75天；在PC9细胞构建的小鼠尾静脉转移模型中，低剂量输注CAR-T细胞即可在80%的小鼠中展现出明确的抗肿瘤活性。在PDX模型中，该CAR-T细胞对TROP2阳性的DFCI243（EGFR del19/T790M）、DFCI161（EGFR L858R/MET扩增）模型均有显著治疗效果，而对TROP2阴性的DFCI642模型（EGFR突变非小细胞肺癌转化为小细胞肺癌）无治疗应答。

TROP2靶向CAR-T细胞可克服ADC耐药

研究团队构建了携带TROP2 T256R突变（导致TROP2表面表达降低）及TOP1 E418K突变（导致ADC载荷耐药）的PC9细胞系，实验证实这两种突变均可导致Dato-DXd产生耐药。但TROP2靶向CAR-T细胞在TROP2 T256R突变的低抗原表达环境中，仍能有效介导细胞毒性，效果接近野生型TROP2细胞水平，同时对TOP1 E418K突变的PC9细胞也具有显著杀伤活性，表明该疗法可有效克服TROP2 ADC的靶内及靶外耐药机制。

全人源VH-only CAR及双表位CAR的开发与疗效

研究团队通过免疫转基因小鼠获得全人源重链可变区（VH）单域的TROP2结合剂，以此构建的CAR-T细胞（如VH681），在体外的杀伤疗效与sacituzumab scFv构建的CAR相当，且在PC9细胞转移模型中展现出更优的肿瘤控制效果及小鼠生存获益。结构分析显示，VH681可结合TROP2的半胱氨酸富含域（CRD），而sacituzumab、datopotamab等TROP2 ADC的scFv均结合TROP2的半胱氨酸贫乏域（CPD），二者表位互不重叠。

基于VH-only结合剂构建的双表位CAR-T细胞（如VH681_375），可同时靶向TROP2的CRD与CPD，在体外对替换为鼠源CPD、鼠源CRD的PC9细胞均能维持稳定的细胞毒性；在小鼠双侧移植瘤模型中，该双表位CAR-T细胞可同时实现对鼠源CPD、鼠源CRD替换的PC9肿瘤的有效控制，使小鼠的生存期较单表位hRS7 CAR-T细胞治疗组翻倍（60天 vs 36.5天，P=0.001）。

研究结论

该研究证实，TROP2靶向CAR-T细胞疗法可有效治疗TROP2阳性实体瘤，同时能克服EGFR抑制剂及TROP2 ADC的临床耐药问题；而基于VH-only单域抗体构建的双表位CAR-T细胞，通过靶向同一抗原的不同表位，可有效避免单一表位靶向CAR-T细胞易出现的抗原逃逸问题，为提升CAR-T细胞疗法的疗效与持久性提供了新思路。该研究通过体外、体内及患者来源模型全面验证，证实TROP2靶向CAR-T细胞对TROP2阳性实体瘤具有显著杀伤活性，可克服EGFR抑制剂及TROP2 ADC耐药，且双表位VH-only CAR能有效避免抗原逃逸，为实体瘤治疗提供了新的有效策略。

参考文献

Brea EJ, Baldacci S, Savage N, et al. Systematic Engineering of TROP2-Targeted CAR T-Cell Therapy Overcomes Resistance Pathways in Solid Tumors[J]. Cancer Immunol Res, 2025,13(11):1749-1763.

审批编号：CN-180675 有效期：2026-6-24

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责任编辑：肿瘤资讯-Yuno
排版编辑：肿瘤资讯-Sally