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周芳教授：新一代BTKi泽布替尼联合ROR1单抗治疗CLL展现出有前景的疗效

08月26日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

慢性淋巴细胞性白血病（CLL）主要发生于中老年人群，是一种具有特定免疫表型特征的成熟B淋巴细胞克隆增殖性肿瘤。CLL以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚集为主要特征。CLL虽进展缓慢，但通常难以治愈，部分患者还可向弥漫大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤转化。近年随着新型治疗手段如布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）抑制剂、ROR1单抗的兴起，CLL的治疗发生了巨大变化。【肿瘤资讯】特将BTK抑制剂泽布替尼和ROR1单抗治疗CLL的研究整理如下，并邀请联勤保障部队解放军第九六〇医院周芳教授对该研究进行点评。

CXCR4/CXCL12等信号通路可调节CLL细胞从血液向淋巴组织的移动，其将在淋巴组织微环境中接受附属细胞发出的生长/存活信号。这需要 CLL 细胞通过基质金属蛋白酶（MMP）（如 MMP9，它是一种 IV 型胶原酶）降解细胞外基质的能力进行外渗。既往研究发现，相对于低水平表达 ROR1（ROR1 低）的 CLL 细胞，高水平表达受体酪氨酸激酶样孤儿受体 1（ROR1 Hi）的 CLL 细胞表达高水平的 MMP9。然而，在无血清培养基中短期培养 ROR1 Hi CLL 细胞会导致 MMP9 表达减弱，而加入外源 Wnt5a 则可抵消这种减弱。Wnt5a 是一种非典型 Wnt 因子，也是 ROR1 的配体，在 CLL 患者血浆中的表达水平明显高于健康成人。通过研究发现，用 Wnt5a刺激血清缺失的CLL 细胞会增强 MMP9 的表达并将其释放到培养基中。Wnt5a的这种作用可受到zilovertamab（又称UC-961，或以前称为cirmtuzumab；20 µg/ml）抑制，而zilovertamab是一种对ROR1高度特异的人源化mAb，可以阻断CLL细胞的ROR1信号传导，这表明MMP9可能部分受Wnt5a诱导的ROR1信号传导调控。

为了验证这一假设，研究者使用了CLL细胞衍生的细胞系MEC1和MEC1-Wnt5a -/-细胞，前者表达内源性Wnt5a，但缺乏ROR1的表达，后者通过CRISPR-Cas9删除了编码Wnt5a的功能基因。用编码ROR1的表达载体稳定转染MEC1或MEC1-Wnt5a -/-细胞，产生了MEC1-ROR1和MEC1-Wnt5a -/-ROR1，其均表达了高水平的表面ROR1（通过流式细胞术评估）。

进一步分析发现，与MEC1细胞、MEC1-Wnt5a -/-或MEC1-Wnt5a -/-ROR1细胞相比，MEC1-ROR1细胞的MMP9表达水平明显更高，侵袭Boyden-Chamber Matrigel的能力也更强。而编码MMP9的基因具有一个可能由NF-kB激活诱导的启动子，因此检测了NF-kB-p65，结果发现MEC1-ROR1细胞的NF-kB-p65激活率明显高于MEC1细胞或MEC1-Wnt5a -/-或MEC1-Wnt5a -/-ROR1细胞。同样，血清饥饿的 ROR1 + CLL 细胞在接受 Wnt5a 处理时也表达了活化的 NF-kB-p65，这种效应也能被zilovertamab所抑制。与该模型一致，研究者发现NF-kB的抑制剂（CAS 545380-34-5，20 nM）也可以阻断Wnt5a诱导的MMP9在ROR1 + CLL细胞中的表达。

另外，研究者还探索了泽布替尼在该类细胞中的效果。泽布替尼作为新一代BTK共价抑制剂高效低毒，已于近期获批用于治疗CLL患者。结果显示，泽布替尼（0.5 µM）不能抑制 Wnt5a诱导的 NF-kB-p65 激活或ROR1 + CLL 细胞中MMP9 的表达。研究者还使用 Boyden-Chamber Matrigel 侵袭试验来研究体外原始CLL细胞在无Wnt5a或有Wnt5a的情况下对 CXCL12 的反应。最终发现，CLL细胞可在CXCL12 的作用下侵袭 Boyden-Chamber Matrigel，而 Wnt5a 可增强这种侵袭的程度。泽布替尼（0.5 µM）可以抑制CXCL12诱导的CLL细胞侵袭Matrigel的能力，但这种药物无法阻止Wnt5a增强CLL细胞的侵袭能力。Zilovertamab可以抑制Wnt5a增强的CLL细胞侵袭能力。此外，泽布替尼和zilovertamab联合治疗在抑制CLL细胞Matrigel侵袭性方面具有相加活性，这支持了联合使用zilovertamab和泽布替尼治疗CLL患者的潜在疗效。

大咖点评

周芳

主任医师

湖南省肿瘤医院淋巴瘤血液内科
湖南省抗癌协会淋巴瘤专业委员会慢性淋巴细胞白血病学组副组长
湖南省抗癌协会血液肿瘤专业委员

周芳教授：这项研究重点探讨了ROR1信号通路在CLL细胞迁移、侵袭及其在淋巴组织微环境中生存的相关性，尤其关注了Wnt5a与ROR1在调控MMP9表达及其下游信号通路中的作用。研究结果对CLL的治疗提供了新的视角，并为未来的治疗策略提供了参考。

研究发现，ROR1 Hi的CLL细胞显示出较高的MMP9表达水平，进而增强了这些细胞穿过基质（如Matrigel）的能力。这表明ROR1通过调控MMP9在CLL细胞迁移和浸润中发挥关键作用。考虑到MMP9在细胞外基质降解和肿瘤细胞转移中的重要性，阻断ROR1信号通路可能成为控制CLL病情进展的有效策略。

Wnt5a可以通过激活ROR1信号通路上调MMP9的表达，这一过程与NF-κB的活化相关。这提示在CLL细胞的迁移和侵袭过程中，Wnt5a是一个重要的促进因子，而ROR1是关键的受体。Wnt5a的高表达在CLL患者的血浆中得到验证，这提示Wnt5a在CLL微环境中可能具有广泛的促进作用。因此，针对Wnt5a或ROR1的靶向疗法可能是干预CLL细胞迁移和组织浸润的重要手段。

zilovertamab（UC-961）作为针对ROR1的特异性单克隆抗体，能够有效阻断Wnt5a诱导的ROR1信号通路，进而抑制MMP9的表达和CLL细胞的侵袭能力。研究表明，zilovertamab在抑制CLL细胞向淋巴组织迁移的过程中具有重要潜力。鉴于其靶向性强、副作用可能较小，zilovertamab有望成为治疗CLL的新型生物靶向药物，尤其适用于对Wnt5a相关通路依赖较高的患者。

研究进一步探讨了BTK抑制剂泽布替尼与zilovertamab的联合疗法。尽管泽布替尼能够抑制CXCL12诱导的CLL细胞侵袭，但其无法阻断Wnt5a增强的侵袭能力，这提示BTK抑制剂在应对Wnt5a/ROR1信号通路时存在局限性。而zilovertamab可以有效抑制Wnt5a的作用，两者联合使用显示出更强的抑制CLL细胞侵袭的效果。此结果支持了在临床中进一步评估泽布替尼和zilovertamab联合治疗的潜力，尤其对于那些对传统BTK抑制剂单药效果欠佳的患者。

未来的研究应进一步探讨Wnt5a/ROR1/NF-κB信号通路在CLL微环境中的作用机制，尤其是如何通过精准靶向干预该通路以延缓或阻止CLL的进展。此外，联合多种机制不同的靶向药物，如zilovertamab与BTK抑制剂，可能成为治疗CLL的有效策略。这种联合治疗不仅能更广泛地抑制CLL细胞的迁移和侵袭，还可能降低耐药风险，提高治疗的总体反应率。

这项研究为理解CLL细胞在微环境中的迁移、浸润和生存提供了重要的分子机制证据，ROR1/Wnt5a/MMP9/NF-κB信号轴在其中发挥了关键作用。泽布替尼与其他靶向药物的联合应用有望进一步提高CLL患者的治疗效果。这种多靶点、组合式的精准治疗策略，代表了未来CLL治疗的重要发展方向。

参考文献

Md Kamrul Hasan, George F. Widhopf II, Thomas J. Kipps; Combined Therapy of Zanubrutinib and Zilovertamab in the Inhibition of Invasive Capability of Chronic Lymphocytic Leukemia Cells. Blood 2023; 142 (Supplement 1): 6517. doi: https://doi.org/10.1182/blood-2023-191114

责任编辑：肿瘤资讯-雨晴
排版编辑：肿瘤资讯-kk

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李国君

冀中能源峰峰集团有限公司总医院 | 血液肿瘤科

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