华氏巨球蛋白血症（WM）是一种以克隆性淋巴浆细胞扩增为特征的B细胞增殖性疾病。尽管大多数WM患者携带MYD88 L265P突变，但研究表明，即使是携带同一突变的患者之间也存在显著的临床和分子异质性。此外，一小部分缺乏MYD88突变的患者可能会表现出不同的临床特征和疾病特性，增加了疾病进展的风险。因此，深入理解WM的克隆异质性对于揭示疾病机制、改善治疗策略和预后评估具有重要意义。【肿瘤资讯】特将该研究的重点内容整理如下，并邀请华中科技大学同济医学院附属协和医院方峻教授对主要内容进行点评。
研究方法
研究者采集了5例新诊断的MYD88 MUT有症状WM患者、2例新诊断的MYD88 WT有症状 WM 患者和2例健康供者（HDs）。随后，研究者按照 10x Genomics 的方案准备用于单细胞分析的样本。
研究结果
不同类型WM 患者的单细胞转录特征
研究者对9例CD19+ 分选的 BM 样本（MYD88MUT，n = 5、MYD88WT，n = 2 和健康捐赠者[HDs]，n = 2）进行了基于液滴的单细胞 RNA 测序，最后共分析了 40087 个单个 CD19+ B 细胞，平均每个样本有 4454.11 个细胞。研究共识别出 19,734 个不同的基因转录本，每个细胞平均有 116,688 个基因。
通过UMAP图对细胞进行可视化，观察到细胞按病情分组，大多数来自HD患者的样本细胞聚集在一起，大多数来自 MYD88WT 患者的细胞也聚集在一起，而大多数来自 MYD88MUT患者的细胞形成了不同的集群，与其他数据集重叠的细胞数量较少，这表明 MYD88MUT群体内部存在异质性。
轻链限制可区分克隆和多克隆 B 细胞群
通过计算每个B细胞亚群中kappa阳性与lambda阳性B细胞的比例（κ/λ比率），研究者能够区分克隆性和非克隆性（健康）细胞群体。
研究结果显示，7例患者中有3例患者是lambda型，4例患者是kappa型。这一分析与血清免疫固定电泳的结果一致，克隆性B细胞在kappa型和lambda型患者中分别高度表达kappa和lambda轻链。HDs的细胞沿IGKC-分数轴均匀分布，kappa阳性B细胞的比例为53.86%，这与正常B细胞中所见的表达模式相符。值得注意的是，在1例IgM λ MYD88MUT患者中，也观察到了表达kappa轻链基因（IGKC）的B细胞小簇。重新评估免疫固定电泳表明，可能存在微弱的kappa轻链。
MYD88WT 和 MYD88MUT 患者的 B 细胞组成
MYD88MUT患者群体的B细胞组成包括6种B细胞亚型，而MYD88WT患者群体的B细胞组成主要限于4种B细胞亚型。MYD88WT患者群体的B细胞组成似乎与HD相似，其中已转换记忆B细胞的群体受到限制，而原始B细胞的组成与其他细胞类型相比过度表达。
综合数据集分析结果显示，HD和MYD88WT患者的B细胞组成几乎共享相同的转录谱，其中HD主要表达原始B细胞群体，并有适度的前B细胞和未转换记忆B细胞群体的表达，而MYD88WT患者主要表达前/原始、原始和未转换记忆B细胞，以及中等表达的浆细胞。
相比之下，MYD88MUT患者的转录谱更为异质，可以被分为2个亚群。在五例 MYD88MUT 患者中，有3例患者不仅表达非转换记忆 B 细胞，还具有丰富的转换记忆 B 细胞和浆母细胞群，但幼稚 B 细胞群很少。另外2例患者未观察到转换记忆 B 细胞和浆母细胞群，但幼稚 B 细胞和部分非转换记忆 B 细胞更丰富。所有5例 MYD88MUT 患者几乎不表达 Pro/pre-B 细胞。转换记忆 B 细胞表现出基因的显著表达，例如 NEB、PCDH9、MAN1A1、FGL2 HCK、CCND2 、 MARCKS，这些发现表明，MYD88MUT和MYD88WT WM患者之间在B细胞组成和转录特征上存在显著差异，这可能对疾病的临床表现和治疗响应有重要影响
不同WM患者和HD之间B细胞转录差异
分析结果显示，一些通常在WM B细胞中表达的基因如MS4A1、CD79A、CD79B和BCL2。出现了上调（修改说明：不同的WM患者，这些基因都上调了？还是其中一部分什么样的患者中基因上调了？原文中并没有明确说明是什么类型WM）除此之外，还发现了一些在WM中尚未充分研究的基因。根据log2 Fold Change值，前5个上调的差异表达基因（包括JCHAIN、SYNE2、ITM2B、NEB和TTN。JCHAIN基因在分泌性免疫中发挥关键作用。SYNE2参与细胞周期依赖性激酶的抑制，可能与B细胞信号或B细胞恶性肿瘤相关。ITM2B是淋巴瘤中BCL6抑制的目标，对生发中心B细胞的发育至关重要。
在下调基因方面，排在前列的基因包括SOX4、NEIL1、BCL7A、CD83和HIF1A。SOX4对维持前B细胞的生存很重要，而NEIL1基因参与DNA修复途径，缺乏NEIL1基因已被证明会减少生发中心B细胞的活性。BCL7A蛋白在GCB淋巴细胞的核中高度表达，而在DLBCL中经常发现BCL7A基因的突变。CD83基因位于染色体6q上，在WM中通常受到影响，而HIF1A在前B和原始B细胞中表达较高，在原始B细胞阶段降低。
另外，DEG的主要生物学过程包括B细胞激活、B细胞分化和造血过程的调控。基因本体比较分析显示，包括NFκB、BCL2、BTK和MYD88在内的不同通路在MYD88MUT与MYD88WT克隆之间显示出不同的基因调控，这可能为这些通路中可能涉及疾病转化和治疗反应的特定基因提供更深入的见解。
MYD88MUT和MYD88WT克隆B细胞在转录上有别于患者体内的正常 B 细胞
在6例患者中，有5例患者在群体间存在显著的DEGs。整体分析共识别出899个DEGs，其中只有92个基因（10.2%）在上述的肿瘤与正常细胞的DE分析中出现。
研究者发现了PCDH9基因在个别患者中特异性表达差异，以及一些在多个患者中共同受影响的基因，如JCHAIN基因的上调、NEB基因的上调，以及SOX4和BCL7A基因的下调。既往研究已经证实，PCDH9基因在胶质母细胞瘤等中因基因拷贝数变化而下调。
此外，研究者还发现了16个在MYD88WT患者中共同表达的基因，在MYD88MUT患者中未发现这些基因。
研究还发现ITM2B、SYNE2、MAN1A1、FGL2和GLCC1在4例MYD88MUT患者中的3例患者中上调，而在MYD88WT患者中没有。FGL2基因在一部分WM病例中高度过表达，表明WM细胞可能对T细胞受体的细胞因子信号有反应。此外，研究者还发现NEIL1基因在MYD88WT患者中下调，而在MYD88MUT患者中没有。ARID5B基因在大部分MYD88MUT患者中下调，而在MYD88WT患者中没有。尽管所有患者都携带CXCR4WT基因型，CXCR4基因在2例MYD88MUT患者中上调，在1例MYD88WT患者中下调。
华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病学研究所
曾任美国Emory大学医学院访问学者
研究方向为淋巴瘤和造血干细胞移植
湖北省医学生物免疫学会（ESMI）常务理事
湖北省医学生物免疫学会（ESMI）淋巴瘤多学科诊疗专家委员会主任委员
湖北省医学生物免疫学会（ESMI）青年专家委员会荣誉主任委员
湖北省临床肿瘤学会（ESCO）血液肿瘤专家委员会常务委员
湖北省临床肿瘤学会（ESCO）血液肿瘤专家委员会中枢淋巴瘤专业委员会副主任委员
湖北省肿瘤医学质量控制中心淋巴瘤质控专家委员会委员
中国老年保健协会肿瘤免疫治疗专业委员会常务委员
亚太医学生物免疫学会血液学分会常务委员
亚太医学生物免疫学会学术委员会委员
中国医药生物技术协会医药生物技术临床应用专业委员会委员
负责国家自然科学基金两项、湖北省卫生厅青年科技人才基金一项。科研成果获得教育部科技进步二等奖一项、湖北省科技进步一等奖二项、武汉市科技进步一等奖一项。在国内外期刊上发表论文三十余篇。主编专著两部、参编“内科学”等专著四部、参译“威廉姆斯血液学中文版（第6版）”
方峻教授：上述研究通过单细胞RNA测序技术分析了携带MYD88 L265P突变和MYD88 WT基因型的WM患者的B细胞。通过单细胞层面的分析，研究揭示了WM患者内部的克隆异质性，这对于个体化治疗策略的制定具有重要意义。了解不同患者的遗传背景和分子特征，有助于为每位患者设计更有效的治疗方案。
研究中提到的基因表达差异，特别是与药物反应性相关的基因（如CXCR4），可能有助于预测患者对特定治疗的反应，从而实现更精确的疾病监测和治疗管理。此外，通过识别与疾病进展和治疗抵抗性相关的分子标志物，该研究为WM的预后评估提供了新的视角，有助于医生更好地判断疾病的严重程度和进展风险。
研究中发现的不同基因表达模式和通路，如NFκB、BCL2和BTK等，可能成为未来治疗的新靶点，有助于开发新的治疗方法。尽管本研究提供了有价值的初步发现，但样本量有限。未来的研究需要在更大的患者群体中验证这些结果，以增强发现的普适性和可靠性。此外，研究者还需要进一步探索与MYD88 L265P和MYD88 WT相关的分子机制，以及它们如何影响疾病的临床表现和治疗响应。
基于单细胞分析结果，未来可以探索针对特定分子通路的新药开发，尤其是针对那些在WM患者中表达异常的基因。
总的来说，上述研究通过单细胞技术为WM的个体化治疗和精准医疗提供了新的见解。尽管需要进一步的研究来验证和扩展这些发现，但其临床意义和未来发展潜力不容忽视。
排版编辑：guangli
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