首页 > 文章详情

张巧花教授：多组学分析，揭示泽布替尼耐药的CLL患者的异质性克隆进化特征

2023年12月08日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

两年一度的国际慢性淋巴细胞白血病研讨会（iwCLL）于近日在美国波士顿成功举行，会上展示了基于慢性淋巴细胞白血病（CLL）病理生物学和治疗等方面的最新研究成果。本次会议上，来自江苏省人民医院的团队报道了一项回顾性分析研，通过综合多组学揭示泽布替尼耐药CLL患者的克隆演变特征，泽布替尼的耐药机制在很大程度上仍未被探索，该研究旨在进一步揭示泽布替尼治疗耐药性发展过程中的潜在治疗靶点。【肿瘤资讯】特邀山西白求恩医院肿瘤中心张巧花教授针对该研究结果进行点评，详情如下。

研究详情

研究背景

慢性淋巴细胞白血病（CLL）是一类以成熟的淋巴细胞在血液、骨髓及淋巴组织等处聚集为特征的血液系统恶性肿瘤，主要发生于中老年人群。我国CLL的发病率虽低于欧美国家，但目前呈现出上升的趋势，且具有发病年龄低、侵袭度高等特点。以Bruton酪氨酸激酶（BTK）抑制剂为代表的靶向治疗药物开启了CLL治疗新的时代，第一代BTK抑制剂在CLL患者中的耐药机制已得到广泛探索。然而，新一代BTK抑制剂（如泽布替尼）的耐药机制仍未完全阐明。本项研究旨在整合了多组学测序分析，以评估泽布替尼耐药的CLL患者的异质性克隆进化特征。

研究方法

该项研究回顾性地分析了10例对泽布替尼耐药的CLL患者。应用覆盖BTK（外显子1~19）、PLCG2（外显子1~33）的深度靶向基因二代测序（NGS）和高灵敏度ddPCR检测BTK Cys481突变。对3例出现进行性淋巴结病的泽布替尼耐药患者的外周血（PB）和淋巴结（LN）进行了匹配的单细胞RNA测序（scRNA-seq）（图1）。

图片1.png 图片2.png 图1 研究流程

研究结果

本研究共纳入10例患者，从开始使用泽布替尼到疾病进展的中位时间为30.5个月，其中2例患者在治疗13个月后组织学均证实为Richter转化（RT）。5例进展中淋巴结肿大的患者接受PET-CT扫描，并进一步在SUVmax最高点进行淋巴结活检或穿刺，2例诊断为RT，2例诊断为加速期CLL（aCLL），1例诊断为CLL进展。

深度靶基因二代测序结果显示，10例患者中8例检出BTK ys481突变（其中1例同时存在BTK Leu528Trp低频突变），1例未检出BTK Cys481突变的患者检出PLCG2突变。4例NGS未检测到BTK突变的患者行ddPCR检测，2例发现BTK Cys481Ser突变（因淋巴结肿大进展，但NGS在骨髓中进行），提示泽布替尼耐药患者存在空间克隆异质性。1例同时存在BTK Cys481突变和BTK Leu528Trp突变的患者中，Cys481Ser （VAF 20.44%）和Cys481Arg （VAF13.87%）， BTK Leu528Trp（5.97%）突变发生在不同的细胞中。BTK Cys481Ser-泽布替尼的晶体结构表明，与BTK WT-泽布替尼相比，BTK Cys481Ser-泽布替尼的氢键被破坏，而BTK Leu528Trp-泽布替尼的晶体结构表明，与BTK WT-泽布替尼相比，BTK Cys481Ser-泽布替尼的空间位阻显著增加，导致BTK和泽布替尼之间的结合自由能降低。

图片3.png 图2 主要研究结果

5例患者中3例出现淋巴结病变进展，3例患者表现不同，1例为RT，1例为aCLL，1例为疾病进展。对匹配的PB和LN患者进行scRNA-seq检测。增殖肿瘤细胞比例在放疗时最高，而在疾病进展时最低。值得注意的是，RT患者表现出MYC、OXPHOS和G2M信号通路显著上调和BCR信号通路显著下调。aCLL显示MYC、OXPHOS和G2M信号通路中度上调，BCR信号通路中度下调，表明其处于放疗和疾病进展之间的中间生物学状态。此外，对BCL-2抗凋亡家族基因表达的分析显示，RT期的肿瘤细胞显著高表达MCL-1，而进展期的肿瘤细胞则相对高表达BCL-2，表明肿瘤细胞BCL-2依赖性表达，在不同疾病特征之间发生了转移。

结论

在对泽布替尼耐药的CLL患者中，BTK Cys481和Leu528是主要的BTK耐药突变。由于患者之间存在空间异质性和克隆演变，应综合使用纵向深度靶向基因NGS和ddPCR来评估耐药克隆的出现。泽布替尼耐药的RT转化型患者测序显示MYC，OXPHOS和G2M通路的上调和BCR信号的下调，同时还出现了MCL-1的上调，这表明了导致在泽布替尼耐药后，耐药患者对维奈克拉用药治疗不敏感的潜在机制。

大咖点评

张巧花

二级教授、主任医师、硕士生导师

山西医学科学院山西白求恩医院肿瘤三科（淋巴瘤科）
省学科带头人，享受国务院特殊津贴
国家科学技术奖励委员会评审专家
中国老年协会淋巴瘤专业委员会副主任委员
中国女医师协会血液肿瘤专业副主任委员
中华中医药学会血液病分会常委
中国血液病精准治疗专委会常委
中国临床肿瘤学会（CSCO）淋巴瘤联盟委员
中国抗癌协会淋巴瘤专业委员
中国抗癌协会血液肿瘤专业委员
山西省抗癌协会淋巴瘤专业主任委员
山西女医师协会淋巴瘤专业主任委员
《白血病·淋巴瘤》杂志编委
历年获山西省科技进步一、二、三等奖共八项。编写论著四部。2008年获中国女医师协会“五洲女子科技奖” 。擅长淋巴瘤、骨髓瘤及白血病的治疗，在“EBV相关的淋巴增殖性疾病”的治疗方面积累了丰富的经验。

张巧花教授：Bruton酪氨酸激酶（BTK）抑制剂为代表的靶向治疗药物开启了CLL治疗新的时代，第一代BTK抑制剂在CLL患者中的耐药机制已得到广泛探索。然而，新一代BTK抑制剂（如泽布替尼）的耐药机制仍未完全阐明。本项研究旨在整合了多组学测序分析，以评估泽布替尼耐药的CLL患者的异质性克隆进化特征。本研究通过对10例泽布替尼耐药的CLL患者进行多组学测序分析，研究揭示了耐药克隆的异质性和进化特征，这对于未来的治疗策略制定至关重要。

该研究中，研究者应用深度靶向基因二代测序（NGS）和高灵敏度ddPCR技术，揭示了BTK Cys481突变在耐药性中的主导作用，同时也发现了低频的BTK Leu528Trp突变。这些发现不仅强调了在耐药性研究中考虑克隆异质性的重要性，而且还表明了在不同组织样本中进行深入分析的必要性。BTK Cys481和Leu528是泽布替尼耐药CLL患者中两个主要的BTK耐药突变。此外，TP53、EGR2、NOTCH1和SF3B1也被发现是泽布替尼耐药的驱动克隆。

特别值得关注的是，本研究首次通过scRNA-seq技术，对耐药CLL患者的外周血和淋巴结样本进行了匹配分析。该方法允许研究者在单细胞水平上观察肿瘤细胞的分子特征，揭示了不同疾病阶段的生物学差异，scRNA-seq分析BCL-2抗凋亡家族表达的差异，CLL患者进展到RT主要依赖于MCL-1，而CLL进展主要依赖于BCL-2。因此，应对泽布替尼耐药性，可能需要采取多靶点治疗策略。例如，可以考虑结合使用针对MCL-1和BCL-2的抑制剂，以及其他信号通路的抑制剂，来攻击肿瘤细胞的多个免疫逃逸机制。这种组合疗法可能有助于克服单一药物治疗的局限性，并提高治疗效果。

综上所述，新一代BTK抑制剂泽布替尼耐药在CLL治疗中是一个重要的临床挑战，尤其是在RT转化的情况下。这项研究目前获得的结果帮助临床医生对泽布替尼耐药性CLL复杂生物学的深入理解，并有可能有助于开发更加精准和有效的治疗方法，以应对耐药性和疾病进展的挑战。

参考文献

HY ZHU, YQ SHA, Y MIAO, SC QIN , LMJ DAI, TL QIU , R JIANG, WWU, Y XIA, L FAN,W XU, H JIN, JY LI. Integrating Multi-Omics to Reveal the Heterogeneous Clonal Evolutionary Characteristics in CLL Patients with Zanubrutinib Resistance. 2023iwCLL. Abstract 1102.

责任编辑：Amiee
排版编辑：guangli

2023年12月10日

徐宝连

浙江中医药大学附属第二医院(浙江省新华医院) | 血液肿瘤科

在对泽布替尼耐药的CLL患者中，BTK Cys481和Leu528是主要的BTK耐药突变。

2023年12月09日

陈熙

南华大学 | 衡阳医学院

新一代BTK抑制剂泽布替尼耐药在CLL治疗中是一个重要的临床挑战，尤其是在RT转化的情况下。

2023年12月08日

欧阳波

酒钢医院 | 呼吸内科

内容很精彩，值得学习！