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再放e彩|2023 AACR：PI3K抑制剂使癌细胞对TTFields敏感

2023年07月03日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

骆纯

教授、主任医师、博士生导师

同济大学附属同济医院神经外科主任
1999年获得第二军医大学神经外科博士学位，师从我国著名神经外科专家朱诚教授、卢亦成教授，曾在德国美因茨大学神经外科中心访问学习。
主攻颅脑及脊髓的高难度手术，擅长微创治疗颅底肿瘤、功能区肿瘤、深部肿瘤、脊髓髓内肿瘤、脑干肿瘤等。
负责国家及省部级科研项目9项，共700余万元。获得国家与省部级科技成果奖7项，其中以第一完成人获得省部级科技成果奖2项。发表论文300余篇，其中SCI论文60余篇，编写专著10余部。首创单侧椎板间开窗术治疗髓内室管膜瘤，改良脊髓髓内血管母细胞瘤显微切除术方式，取得良好的手术效果。这两种手术方法在行业顶级期刊《Neurosurgery》上发表。
上海市医师协会神经外科专业委员会委员
上海市医学会神经外科专业委员会肿瘤学组副组长
上海市中西医结合学会神经外科专业委员会副主任委员
世界华人神经外科协会颅脑创伤专家委员会委员
世界神经外科协会联盟会员
《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》编委
《中国外科年鉴》神经外科主编

专家点评

AACR摘要号：4860
PI3K抑制剂使癌细胞对肿瘤电场治疗(TTFields)敏感

研究介绍

肿瘤电场治疗(TTFields)是一种施加物理力破坏对癌细胞活性和肿瘤进展至关重要的细胞进程的电场。

TTFields疗法已获批用于治疗新诊断胶质母细胞瘤(GBM)、复发性GBM或不可切除的胸膜间皮瘤。

本研究旨在确定TTFields潜在的逃逸机制，以及靶向抑制这些通路使细胞对TTFields重新敏感的可能性。

研究方法

TTFields的应用

使用inovitro系统，TTFields(1.7V/cm RMS)处理U-87MG GBM细胞(200 kHz)、 A2780卵巢癌细胞(200 kHz)或H1229 NSCLC细胞(150 kHz)

细胞计数

使用流式细胞仪对处理的细胞计数，并计算相对于对照组的细胞毒性

LUMINEX

使用AKT/mTOR(磷蛋白)-11Plex LUMINEX试剂盒(48-611MAG，Milipore)， LUMINEX技术检测细胞裂解物。TTFields和对照组之间的对数倍数变化为磷酸化比率

蛋白质印记

使用适当的抗体分析处理细胞裂解物的AKT磷酸化(Ser473)、总AKT水平，以及FAK磷酸化(Tyr397)、总FAK水平。相对于GAPDH的定量条带强度

免疫组化

Sprague Dawley(SD)大鼠肝内接种N1S1 HCC细胞，C57Bl/6小鼠卵巢囊内接种荧光素酶转染的MOSE卵巢癌细胞(MOSE-FFL)，肺内接种LL/2 NSCLC细胞。分别连续应用TTFields或假热：150 kHz，5d；200 kHz，11d；150 kHz，10d。福尔马林固定、石蜡包埋的肿瘤切片通过免疫组化、苏木精复染检测pAKT

PI3K抑制剂试验

TTFields处理A2780或H1299细胞6天，前3天联用PI3K抑制剂Alpelisib(分别为1nM或250nM)。在第3天检测AKT磷酸化，在第6天检测疗效(细胞计数和集落形成)

克隆分析

收集处理的细胞，重新铺片，并生长21天。然后，对菌落进行染色(0.5%结晶紫溶液)，计数并计算相对于对照组的克隆效应

体内疗效

接种MOSE-FFL细胞的C57BL/6小鼠接受TTFields(200 kHz)或假热处理，每日经口强饲Alpelisib(25mg/kg/d)或溶剂。治疗结束后采用活体成像系统(IVIS)测量肿瘤体积，检测荧光素信号作为肿瘤体积指标

研究结果

● 随着时间的推移，TTFields引起持续的细胞毒性作用，但随着作用时间的延长，其敏感性降低（图1）。