美国癌症研究协会（AACR）年会是全球最具影响力的肿瘤科学盛会。从人口科学及预防，到癌症生物学、转化医学和临床研究，再到生存和科学倡导，AACR年会为我们展现了世界各地癌症研究机构的卓越成果。2022年AACR年会将于美国时间4.8-4.13召开，近期部分摘要已发布，本期内容【肿瘤资讯】为您整理了乳腺癌内分泌治疗亮点汇总——转化研究系列（下）！
乳腺癌细胞中雌激素受体激活Gli的特征[1]
核内激素受体超家族包括一组最著名的蛋白质，当与配体结合时具有条件活性，发挥主要转录因子的功能。其中，研究者发现这个家族的一个重要成员，雌激素受体[ER-α]具有激活转录因子Gli家族的第二功能。Gli被公认为是activeHedgehog（Hh）信号的介质，在细胞发育和生长中起重要作用。Gli活性受翻译后蛋白水解过程调节，Hedgehog信号可抑制该过程。之前研究发现，在前列腺癌中，配体激活的雄激素受体[AR]在其蛋白加工结构域识别并结合Gli蛋白。这种结合使Gli蛋白以其未蛋白水解的活性形式稳定，并绕过Hedgehog信号，从而通过Gli蛋白的非经典激活促进癌症进展。由于AR和ER之间的高度相似性，研究者假设类似的Gli调节可能在乳腺癌（BrCA）进展中发挥作用，并检测了人ER-α在乳腺癌中结合和激活Gli的能力，并评价了该通路在肿瘤细胞生长中的作用。
在有或者没有激素配体的情况下，研究者使用Gli-荧光素酶报告了293T和乳腺癌细胞（MCF7，T47D，MDA-MB-453） 基因实验测量的Gli活性。通过免疫共沉淀和邻近连接试验评价了Gli3和ER-α之间的相互作用，并通过免疫印迹评估了乳腺癌细胞提取物中Gli3的稳定性。同时还研究了稳定敲低ER-α后（通过氟维司群处理）对Gli3稳定性、核内ER-α-Gli3复合物形成和Gli报告活性的影响，以及通过qPCR测定了乳腺癌细胞中存在和不存在雌二醇时Gli靶基因的表达水平。最后，研究者通过Gli3敲除和Cyquant实验评估了Gli3表达对乳腺癌生长的重要性。
研究发现，内质网与Gli3免疫共沉淀。转染ER-α可增加Glireporter活性，雌二醇处理可进一步增加Glireporter活性。急性（2 h）雌二醇处理增加了乳腺癌细胞中核内ER-α-Gli3复合物的形成。长期（48 h）雌二醇处理增加了乳腺癌细胞中Gli3的稳定性和内源性活性。ER-α的去稳定或敲低降低了雌二醇诱导的ER-α-Gli3复合物的形成以及乳腺癌细胞中Gli活性和稳定性。此外，敲低Gli3的siRNA可减少乳腺癌细胞的生长。
总的来说，本研究结果揭示了激素受体ER和AR分别在乳腺癌和前列腺癌中调节Gli致癌转录活性的新作用。
在乳腺癌侵袭和转移中，雄激素受体剪接变异体的功能特征[2]
越来越多的证据表明雄激素受体（AR）在乳腺癌中的预后和治疗价值，尤其是三阴性乳腺癌（TNBC）。多种组织中存在AR的剪接变体（ARV）；尤其是约110 kDa的全长AR（AR-fl）和约67 kDa的C-末端配体结合域（LBD）截短的AR亚型（AR-V7）。配体非依赖性AR-V7在前列腺癌中组成性表达并产生去势抵抗性。由于ARVs在乳腺癌中的无可辩驳的作用，研究者评估了它们在细胞系中的表达谱及其在来自印度的乳腺癌患者中的患病率和临床病理学相关性。
研究收集了MDA-MB-231、MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞系，并招募了38例在印度三级医疗中心接受手术干预的乳腺癌新发病例。获得患者知情同意后，研究者收集了肿瘤及癌旁良性组织，并分别通过qRT-PCR、免疫印迹法和免疫组织化学（IHC）评价ARVs在转录组和蛋白质组水平的表达。为了进行功能注释，在基于Lipofectamine 3000的转染促进下，使用不同靶向的siRNAs在体外敲低ARVs。在免疫印迹法和IHC中观察到很强的互补性。
在MDA-MB-453中所有的ARVs都显著高于MCF7和MDA-MB-231细胞。然而，在高侵袭性TNBC细胞系MDA-MB-231中，AR-V7与AR-fl的表达比值升高。67%的患者AR免疫染色阳性（n = 38），大多数患者为管腔表型（37%），表达两种显著的ARV，而1/3的TNBC组为AR阳性，与AR-fl相比，患者样本的一个子集也表现出AR-V7的显著上调。这些患者预后差，具有侵袭性特征。siRNA敲除所有ARVs导致侵袭和上皮间质转化（EMT）减少。有趣的是，敲除AR-V7以外的ARV，恢复了侵袭性，表明AR-V7的代偿行为。
本研究证明了乳腺癌中存在ARV，特别关注AR-V7。LBD截短的AR-V7可增强乳腺癌细胞系生长。本研究进一步鼓励AR阳性乳腺癌进行ARVs表达筛查，作为侵袭性表型和治疗耐药性的预后生物标志物。
抑制雌激素受体信号传导作为ER + 乳腺癌放射增敏的策略[3]
雌激素受体（ER）在超过80%的乳腺肿瘤中表达，已被证明是乳腺癌（BC）发病的重要驱动因素，因此是一线治疗的有效靶点。虽然放射治疗（RT）和内分泌治疗（ET）均用于ER + BC的治疗，但ET对肿瘤放射增敏的影响仍不清楚，ET治疗可能具有基于G1细胞阻滞的放射防护作用。在此，研究者使用各种药理学方法评估了ER介导的放射增敏在ER + BC中的疗效和机制。
研究者使用克隆形成试验评估ER抑制剂（他莫昔芬[TAM]、氟维司群[FULV]、AZD9496）的放射增敏作用。通过中性彗星试验评估DNA损伤，并评估同源重组（HR）或非同源末端连接（NHEJ）的效率以及细胞周期、细胞凋亡和衰老的变化。用MCF-7异种移植模型评估TAM与RT在体内的有效性。
结果显示，选择性雌激素受体调节剂TAM放射增敏ER + MCF-7（增强比[enhR]：1.14-1.50）和T47D（enhR：1.33-1.60）细胞，而非ER阴性SUM-159细胞（enhR：0.99-1.02）。选择性雌激素受体降解剂（SERD）FULV在MCF-7（enhR：1.33-1.76）和T47D细胞（enhR：0.97-2.81）中具有相似的放射增敏作用，而在SUM-159细胞中未观察到放射增敏作用（enhR：1.01-1.03）。新型口服SERD AZD9496放射增敏MCF-7细胞（enhR：1.36-1.56）。通过彗星试验测定，与单独RT相比，用TAM和RT处理的MCF-7细胞的dsDNA断裂增加（P < 0.05），并且用TAM处理的NHEJ介导的修复减少（P < 0.05）。Rad51病灶或报告基因介导的HR修复未观察到变化（P = NS）。RT单独和联合TAM或FULV诱导的细胞周期阻滞水平相似，表明联合治疗的放射增敏与细胞周期无关。TAM、FULV、RT或联合治疗的细胞凋亡无显著变化（P = NS）。尽管TAM或FULV确实诱导衰老，但ET联合RT增加了衰老诱导（P < 0.05）。在体内，联合RT和TAM导致肿瘤倍增天数显著延迟（对照：17，TAM：40，RT：32，TAM + RT：未定义；P < 0.0001），与联合治疗相比，单独接受TAM或RT治疗的小鼠之间肿瘤生长存在显著差异，联合治疗未增加毒性或皮肤病变。
研究数据表明，TAM、FULV或AZD9496可以使ER + 乳腺肿瘤放射增敏，这些药物与RT可能对放射增敏更有效。这项工作也支持对接受ET的患者进行RT时间的进一步临床研究，包括在RT期间使用ET，尤其是在RT前开始ET已越来越多地被用作桥接治疗，在COVID-19大流行期间同时使用ET + RT。
小叶乳腺癌的糖皮质激素受体生物学[4]
虽然小叶乳腺癌被认为不常见，但在美国每年估计有39,000例新发浸润性小叶癌（ILC）病例，使其成为所有肿瘤类型中的第六大常见病例。ILC因其转移至肠（腹膜）和肺（胸膜）内衬浆膜表面的独特器官转移倾向性，导致诊断特别具有挑战性，并且总体预后不良。
研究人员推测GR的激活将减缓ILC细胞的体外和体内增殖，降低其转移潜能。因此，使用来自142个ILC肿瘤的转录组数据和来自METABRIC数据集的长期随访临床数据进行分析，研究人员发现随着GR（NR3 C1）表达（和推测的活性）的增加，患者总生存期有改善的趋势。
初步体外数据显示，与溶剂对照相比，GR激动剂地塞米松处理的ILC细胞系（MDA-MB-134IV）细胞增殖减慢。ILC细胞系（MDA-MB-134IV和SUM44PE）对细胞外成分的粘附偏好存在显著差异，同时还研究了GR是否介导ILC细胞转移的器官亲和性。初步的转录组数据有助于深入了解ER和GR激活引起的增殖和粘附基因表达变化，结果显示两个GR + ILC患者来源的类器官系具有GR依赖性增殖和粘附表型。
在未来的研究中，研究人员将利用体内小鼠模型，概括ILC从原位癌进展为浸润性乳腺癌，最后进展为远处器官的转移定植，以确定GR活性在增殖和浆膜表面转移中的作用。
[1] Shabnam Massah, Jane Foo, Na Li, et al. Characterization of Gli activation by the estrogen receptor in breast cancer cells. 2022 AACR abs5283.
[2] Tryambak Pratap Srivastava, Ruby Dhar, Anurag Srivastava, et al. Functional characterization of Androgen Receptor splice variants in breast cancer invasion and metastasis. 2022 AACR abs2694/9.
[3] Anna R. Michmerhuizen, Lynn M. Lerner, Andrea M, et al. Inhibition of estrogen receptor signaling as a strategy for radiosensitization of ER+ breast cancers。 2022 AACR abs2697/12.
[4] Candace Frerich, Ishrat Durdana, Ariella Hanker, et al. Glucocorticoid receptor biology in lobular breast cancer. 2022 AACR abs2699/14.
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