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【2018ASH重磅剧透】LBA-7：CLL Venetoclax耐药机制：BCL2基因重现性Gly101Val 突变

2018年11月29日

编译：初出茅庐

来源：肿瘤资讯

2018年 12月1~4日，第60届美国血液学年会（ASH）即将于圣地亚哥盛大开幕，这场血液学领域的全球性顶级学术会议无疑是万众瞩目，而“Late Breaking Abstracts（LBA）”则是优中选优的重磅研究，当属ASH大会的重头戏。在慢性淋巴细胞白血病（CLL）领域，本届ASH会议遴选了一项研究作为LBA，具体内容现已出炉！【肿瘤资讯】带您先睹为快！

LBA-7 Acquisition of the Recurrent Gly101Val Mutation in BCL2 Confers Resistance to Venetoclax in Patients with Progressive Chronic Lymphocytic Leukemia

时间：2018年12月4日 7:30 AM-9:15 AM

讲者：Piers Blombery, MBBS

地点：Hall AB (San Diego Convention Center)

类型：Late-Breaking Abstracts Session

研究背景

Venetoclax通过抑制BCL-2，治疗CLL的有效率可高达80%，可使之前接受过多种其他药物治疗的难治患者获得完全缓解。然而，尽管患者可达到深且持久的缓解，大多数患者最终会在治疗过程发生疾病进展，对Venetoclax耐药。目前Venetoclax耐药机制尚不清楚。

研究方法

从3项早期临床试验中接受Venetoclax治疗的67例复发CLL患者（Anderson et al, Blood 2017；129：3362-3370）中，研究者挑选出Venetoclax治疗期间发生疾病进展的患者（不包括Richter转化），并检测分析了其基因组学改变。在疾病进展前和疾病进展后患者标本中检测了淋系肿瘤常见33个重现基因突变。中位随访36个月（6～73），共21例患者疾病进展，15例患者有配对标本可供分析。

研究结果

在15例患者中，7例患者检测到BCL2 (NM_000633.2:c.302G>T, p.[Gly101Val])杂合核苷酸变异（图1A）。采用高度敏感（检测下限0.01%）和特异性液滴数字PCR（ddPCR）方法进一步研究发现，在接受Venetoclax治疗后19-42个月首次检测出低频Gly101Val等位基因，比按照一般标准评估疾病进展时提前25个月。本队列中患者在接受Venetoclax治疗前未检测到Gly101Val突变；未接受Venetoclax治疗的患者（CLL [n=74]、NHL [n=198]、骨髓瘤 [n=103] ）中也未发现此突变；COSMIC和gnomAD数据库中也未描述过此种突变。

为了进一步研究Gly101Val突变是否可直接导致Venetoclax耐药，研究人员利用两个B细胞来源细胞系RS4;11和 KMS-PE-12研究此种突变功能。结果显示，Gly101Val突变细胞比表达野生型BCL2细胞对Venetoclax敏感性低30倍，持续暴露于亚致死浓度Venetoclax 3周，Gly101Val突变更具选择优势。在Gly101Val突变原代细胞中无论使用短期存活实验和骨髓基质模型培养实验都观察到同样现象 (Thijssen et al, Haematologica 2015;100:302-6)。Gly101Val突变原代细胞对Venetoclax耐药浓度高于体内可达到的浓度。无Venetoclax作用下，Gly101Val突变基因表现和WT基因相似，通过保护细胞免受细胞毒诱导凋亡而保持正常功能。

在结合分析中，与WT BCL2相比，体外Venetoclax与BIM竞争Gly101Val突变体结合的能力显著降低（~180倍）。这种结合减低的原因可能是因为在Venetoclax结合位点区域有大量的缬氨酸残基（图1B）。细胞内分析结果显示，Venetoclax易使BAX和BAK从WT BCL2移位，这些促凋亡分子与Gly101Val BCL2突变体结合时则不发挥作用。

另外，对于疾病进展期的患者，并不是所有CLL细胞都存在Gly101Val突变，即进展期的患者可能同时存在着有Gly101Val突变和没有Gly101Val突变的肿瘤细胞亚克隆。质谱流式细胞仪（CyTOF）结果显示，WT BCL2亚克隆中BCL-xL升高，而Gly101Val亚克隆中BCL-xL表达最低。这些数据共同说明，虽然Gly101Val突变足以介导Venetoclax耐药，但可能也存在其他机制。

研究结论

BCl-2基因发生Gly101Val突变导致了进展性慢性淋巴细胞白血病患者对Venetoclax的耐药。患者原代细胞和转基因细胞中，Gly101Val突变均可破坏Venetoclax与BCL2结合从而介导耐药。体外药物作用下Gly101Val突变细胞比野生型细胞有选择性生长优势。该突变帮助我们更好地理解Venetoclax治疗CLL耐药机制，并可成为监测Venetoclax治疗CLL疾病进展的生物标志物。

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