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地舒单抗通过抑制SPP1并增强细胞毒性T细胞活性，提升抗肿瘤免疫反应

05月20日

整理：肿瘤资讯

来源：肿瘤资讯

地舒单抗是一种RANK配体抑制剂，主要用于治疗骨质疏松症、骨转移瘤和骨巨细胞瘤（GCTB）等疾病，其通过抑制RANKL从而抑制破骨细胞的形成、功能和存活，从而减少骨分解、增加骨密度并降低骨折风险。研究发现，RANKL/RANK通路在抗肿瘤免疫中具有重要作用，抑制RANKL信号可以减少胸腺T细胞的负向选择，从而促进肿瘤特异性T细胞的生成。此外，在小鼠乳腺癌模型中，阻断RANK信号可增强CD8+ T细胞浸润并诱导抗肿瘤免疫反应。临床上，地舒单抗与免疫检查点抑制剂联合使用显示出一定的疗效，但具体分子机制尚不明确。SPP1（骨桥蛋白）作为一种多功能蛋白，受NF-κB调控，与多种生理和病理过程相关，包括免疫反应和肿瘤进展。既往研究发现，SPP1的高表达与不良预后相关，并可通过CD44调控CD8+ T细胞活化及肿瘤免疫逃逸。此外，CXCL9:SPP1巨噬细胞极化与临床结局密切相关，高比例的SPP1阳性巨噬细胞与较低的T细胞丰度和较差的临床结果相关。然而，地舒单抗在抗肿瘤免疫中的作用尚未完全阐明。近期，一项发表在CANCER IMMUNOLOGY RESEARCH上的研究旨在探索地舒单抗是否能够通过调节SPP1及增强细胞毒性T细胞活性来改善抗肿瘤免疫效果。【肿瘤资讯】特整理研究核心内容，以飨读者。

研究方法

1. 样本收集

研究遵循《赫尔辛基宣言》，并获得香港大学/香港医院管理局香港西区伦理审查委员会批准。入组患者需经组织病理学确诊为GCTB，且样本量充足并提供书面知情同意。共纳入九名患者的样本进行单细胞分析，样本在手术切除或活检过程中收集，由经验丰富的病理学家和骨科医生团队进行诊断和分级。样本采集后立即置于冰上并在4°C下保存，确保在切除后24小时内处理，以保证样本完整性。

2. 单细胞RNA测序分析

研究使用单细胞RNA测序技术对九个人类GCTB样本进行了分析，其中包括六个未经治疗的样本和三个仅接受地舒单抗治疗的样本。通过Cell Ranger和Seurat工具处理数据，利用STAR算法将Illumina测序输出的FASTQ文件与人类参考基因组GRCh38进行比对，并生成基因条形码矩阵。在质量控制中，过滤掉低质量细胞（每细胞少于200个基因、少于3个细胞/基因、少于7000 nFeature_RNA或大于15%线粒体基因）。通过FindAllMarkers和FindMarkers函数识别差异表达基因，设置阈值为logfc≥0.25且P_val_adj<0.05。

3. 免疫组化验证

研究使用免疫组化染色验证了地舒单抗对SPP1和CD8表达的影响。收集FFPE组织块，进行脱蜡、复水及抗原修复后，使用特异性抗体标记SPP1、CD8、PD-1和PD-L1，并通过QuPath软件预测阳性细胞比例。

4. 泛癌分析

基于TCGA数据库中的8975名患者数据，涵盖35种癌症类型进行泛癌分析。

研究结果

1. GCTB单细胞图谱构建

研究对九个人类GCTB样本进行单细胞分析，构建了包含77218个细胞的图谱，主要分为间充质细胞、内皮细胞和白细胞三个细胞簇。

2. 对肿瘤免疫微环境的影响

地舒单抗治疗可使肿瘤细胞中与炎症反应相关的基因表达改变，通过抑制SPP1表达和减少APOE TAMs来削弱免疫抑制，诱导炎症因子释放，吸引免疫细胞浸润，增加细胞毒性T细胞数量，减少肿瘤细胞比例，将免疫“冷”肿瘤转化为免疫“热”肿瘤。

3. 信号通路调控分析

地舒单抗通过调节RANKL-NF-κB-SPP1信号通路抑制SPP1表达，进而上调IL10水平并增加细胞毒性T细胞数量。

4. 地舒单抗对GCTB的作用

与未接受地舒单抗治疗的良性GCTB相比，未接受地舒单抗治疗的恶性GCTB样本中也观察到MIF、PTN和CXCL14等炎症因子在肿瘤细胞中显著表达，且炎症细胞比例增加，但其T细胞耗竭信号通路显著增加，这些耗竭信号通路主要源自APOETAMs。对九例接受地舒单抗治疗前后配对样本的免疫组化分析结果显示，地舒单抗使CD8+ T细胞比例从2.89%提升至6.24%，而SPP1阳性细胞比例从70.3%降至14.7%。此外，CD8:SPP1比值显著降低。

5. 泛癌分析结果

涉及34种癌症类型的泛癌分析结果显示，CD8A和SPP1分别与更好的和更差的临床结果相关，且在不同癌症类型中CD8A和SPP1表达水平呈负相关，CD8A:SPP1比值与14种癌症类型的总体生存率显著相关，相较于单独的CD8A或SPP1表达具有更高的预后价值。IL10和SPP1呈负相关，而IL10和CD8A呈正相关。

结论

本研究通过单细胞RNA测序和配对样本的免疫组化分析，揭示了地舒单抗在GCTB治疗中通过抑制SPP1和增强细胞毒性T细胞发挥抗肿瘤免疫作用的机制，并通过泛癌分析证实了CD8A:SPP1比值在多种癌症中的预后价值，为地舒单抗在癌症免疫治疗中的应用提供了新的视角和潜在的生物标志物，有望使更多癌症患者受益。

编者按

地舒单抗作为一款靶向RANKL的单克隆抗体，在骨质疏松症、骨转移瘤及GCTB等疾病的治疗中已取得显著成果。然而，其在抗肿瘤免疫领域的潜力尚未被充分挖掘。本文通过单细胞RNA测序技术对GCTB样本进行深入分析，结合配对样本的免疫组化验证以及泛癌分析，揭示了地舒单抗全新的作用机制——抑制SPP1表达并增强细胞毒性T细胞活性，从而重塑肿瘤免疫微环境。这一发现不仅为GCTB的治疗提供了新的视角，更为泛癌种免疫治疗开辟了新途径。

研究团队构建的GCTB单细胞图谱，精准勾勒出间充质细胞、内皮细胞和白细胞等主要细胞群及其亚群的基因表达特征，为深入理解GCTB的细胞组成和分子特征奠定了基础。在此基础上，研究发现地舒单抗治疗可使肿瘤细胞中与炎症反应相关的基因表达发生显著改变，诱导炎症因子的释放，吸引免疫细胞浸润，将免疫“冷”肿瘤转变为免疫“热”肿瘤，进而发挥抗肿瘤作用。同时，地舒单抗通过抑制SPP1表达，阻断了其对CD8+T细胞的抑制作用，使细胞毒性T细胞数量增加，增强了机体对肿瘤的免疫监视和清除能力。

泛癌分析进一步证实了CD8A:SPP1比值在多种癌症中的预后价值，这一比值有望成为评估肿瘤患者免疫状态和预后的新指标，为临床治疗决策提供重要参考。此外，研究还提示地舒单抗可能与免疫检查点抑制剂具有协同作用，为联合免疫治疗策略的开发提供了理论依据。该研究不仅深化了临床对地舒单抗免疫调节机制的认识，还为肿瘤免疫治疗领域的创新研究和临床实践注入了新的活力，有望推动地舒单抗在更广泛的癌症治疗中发挥价值，使更多患者从中受益。

参考文献

Su Z, Yeung MCF, Han S, et al. Denosumab Enhances Antitumor Immunity by Suppressing SPP1 and Boosting Cytotoxic T Cells. Cancer Immunol Res. 2025;13(5):646-660. doi:10.1158/2326-6066.CIR-24-1094

责任编辑：肿瘤资讯-Annie
排版编辑：肿瘤资讯-IRIS

05月20日

武亚东

首都医科大学附属北京友谊医院 | 肿瘤外科

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