套细胞淋巴瘤(MCL)是一种异质性B细胞淋巴瘤，随着诊疗方法的提升，MCL需进行更精准的分层从而改善其预后。SAMHD1表达水平已被证明可以准确预测急性髓系白血病（AML）患者对大剂量阿糖胞苷巩固治疗的反应程度。因此，探索有效的预后预测分子标记物对于指导制定临床治疗方案，实现对患者的精准治疗具有重要的意义。为了更好地预测MCL的治疗反应，本文旨在评估SAMHD1是否可以预测MCL患者对基于大剂量阿糖胞苷化疗方案反应的潜在生物标志物。
研究背景
MCL具有异质性，多数患者临床进程具有侵袭性，对治疗反应较差。利妥昔单抗和强化治疗方法如自体干细胞移植(ASCT)显著改善了MCL的预后。欧洲套细胞淋巴瘤协作网(EMCLN)两项重要研究为MCL患者的标准治疗提供了重要价值：MCL Younger试验表明含大剂量阿糖胞苷方案可提高65岁或更年轻患者的无失败生存率(FFS)。MCL Elderly试验表明在不适合大剂量化疗的65岁以上患者中，利妥昔单抗联合氟达拉滨及环磷酰胺(R-FC)的总生存期(OS)低于利妥昔单抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和强的松(R-CHOP)。此外，MCL Elderly试验表明利妥昔单抗维持治疗显可著延长患者OS。
MCL仍然是一种不可治愈的疾病，约1/3 MCL患者在5年内复发，其中近40%为难治患者。尽管MCL国际预后指数(MIPI)内的变量对MCL具有预测预后意义，但MCL早期或晚期复发的生物学因素尚未完全了解。SAMHD1是一种三磷酸水解酶，将脱氧核苷三磷酸(DNTPs)水解为脱氧核糖核苷和无机三磷酸。SAMHD1高表达可导致阿糖胞苷活性代谢物的水解增强，从而消除其细胞毒性作用。除阿糖胞苷外，结构相似的抗肿瘤药物如氟达拉滨、奈拉滨或地西他滨，也被认为是SAMHD1的底物，可能会限制其治疗血液肿瘤的疗效。然而，有研究报道SAMHD1可作为肿瘤抑制因子通过启动子甲基化导致其表达降低，与Sézary综合征和肺腺癌有关。此外，SAMHD1突变导致mRNA和蛋白表达降低，并被认为是慢性淋巴细胞白血病(CLL)肿瘤发生的潜在驱动因素。因此，本研究旨在探索SAMHD1高表达是否能够预测MCL患者对大剂量阿糖胞苷或氟达拉滨诱导治疗效果的影响。
研究方法
该研究共纳入MCL Younger和MCL Elderly试验中189例患者，采用免疫组织化学方法检测SAMHD1蛋白表达水平及二代测序方法检测其突变状态。在人群队列中分析SAMHD1的表达和突变对接受氟达拉滨或阿糖胞苷治疗的MCL患者预后的影响。体外实验分析B细胞淋巴瘤细胞系中SAMHD1的表达，研究阿糖胞苷、氟达拉滨和临床相关联合治疗时SAMHD1表达对治疗效果的影响。
研究结果
MCL Younger和Elderly试验研究子集的患者特征
该研究分别从MCL Younger和MCL Elderly试验中纳入106例和83例。与排除的患者相比，MCL Younger试验中选择的患者年龄较小(P=0.001)、MIPI评分较低(P=0.0004)及白细胞计数(P=0.016)较低。与仅接受R-CHOP诱导治疗的患者相比，接受R-CHOP/R-DHAP(利妥昔单抗、地塞米松、顺铂、大剂量阿糖胞苷)治疗的患者的FFS在研究亚组中仍可获益(图1)。MCL Elderly试验中纳入的患者也与排除的患者临床特征相似相似，除了IV期患者的数量在研究队列中更多(P=0.048)。与R-FC相比，RCHOP治疗的OS更有优势(图1)。综上所述，该研究子集纳入的人群具有较好的代表性。
图1. MCL Younger和MCL Elderly试验不同治疗组生存比较：FFS（A，C）；OS（B，D）；MCL Younger（A，B）或MCL Elderly队列（C，D）。
SAMHD1表达水平检测
图2A，B显示了同一区域SAMHD1和CD3代表性染色情况，SAMHD1染色强度双峰分布图表明，肿瘤细胞和T细胞SAMHD1表达水平明显不同图2C，SAMHD1染色强度在T细胞丰富的区域显著增强(图1A，B)。该研究进一步从新鲜组织中分离出单细胞悬液，并对其进行CD3、CD19、存活率和SAMHD1的染色，发现T细胞SAMHD1的表达水平显著高于B细胞(n=8，P=0.01，图2D)，表明SAMHD1的表达水平可以区分淋巴结来源的B细胞和T细胞。此外，图2E表明图像自动分析与病理学评估的SAMHD1表达值相关性较好。
图2. SAMHD1表达水平量化
MCL中SAMHD1表达与Ki-67表达的相关性
该研究将SAMHD1表达水平与MCL最重要的危险因素进行相关性分析，包括MIPI评分、其组成变量(年龄、ECOG、LDH、白血球计数)和增殖标记物Ki-67(n=150，表1)。结果表明无论是MIPI评分还是其组成变量与SAMHD1的表达水平没有明显的相关性，只有增殖标记物Ki-67与SAMHD1的表达水平呈中度相关(Spearman‘s rho=0.26，P=0.0015)。
表1. MCL危险因素与SAMHD1的表达水平相关性分析
SAMHD1表达对临床结局的影响
该研究通过Logistic回归模型拟合分析SAMHD1的表达是否影响接受治疗患者的CR率，发现在MCL Young试验中SAMHD1高表达与接受大剂量阿糖胞苷治疗的患者的CR率降低无关(P=0.16，表2)。同样，SAMHD1的表达在MCL Young试验中对仅接受R-CHOP诱导的患者(P=0.62)以及在MCL Elderly试验中接受R-FC(P=0.58)或R-CHOP(P=0.92)治疗的患者CR率没有影响(表2)。
进一步分析SAMHD1表达对FFS的预测价值，MCL Young试验中SAMHD1的表达在R-CHOP/R-DHAP（P=0.73）和R-CHOP/R-CHOP治疗组（P=0.36，表3）中FFS无显著区别。与COX回归结果一致，SAMHD1不同表达水平(≤0.5，>0.5和≤0.67，>0.67和≤1，>1)在R-CHOP Only 组(图3A)和R-CHOP/R-DHAP 组(图3B)中无显著差异。MCL Elderly试验中SAMHD1高表达可显著改善R-CHOP组FFS(P=0.0416，图4A，表3)，但在R-FC组未观察到(P=0.64，图4B，表3)。
表2. 完全缓解的Logistic回归模型
表3. FFS的Cox回归模型
图3. MCL Younger试验中SAMHD1表达对FFS的影响
图4. MCL Elderly试验中SAMHD1表达对FFS的影响
MCL患者SAMHD1基因突变的影响
为了评估MCL患者基于阿糖胞苷诱导治疗后SAMHD1突变对SAMHD1表达水平和预后的影响，该研究发现13例患者(7.1%)至少有1例发生SAMHD1基因突变，SAMHD1突变对MCL患者FFS没有显著影响(P=0.47)(图5A)。在可获得SAMHD1的表达水平的44例突变患者中，其中3例患者至少有1例发生SAMHD1突变，SAMHD1突变通常导致SAMHD1蛋白表达降低，但未达到统计学意义(图5B，P=0.27)。
图5. SAMHD1突变临床结局和表达水平变化
联合用药在体外克服SAMHD1的负面影响
该研究进一步对SAMHD1在MCL(Granta-519，Maver-1，Mino，JVM-2，U-937，UPN1，Z-138)，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(HLY-1，OCI-Ly3，OCI-Ly19，SU-DHL-4，SU-DHL-6，DoHH2)和Burkitt淋巴瘤(BL)(Raji，BL-60)细胞系中的表达水平进行定量研究（图6A）发现SAMHD1在这些细胞系中呈异质性表达，且免疫印迹和流式细胞术方法检测的结果具有高度相关性(图6B，R=0.85，P<0.0001)。
在上述细胞株在用阿糖胞苷、氟达拉滨、环磷酰胺、地塞米松、阿霉素、奥沙利铂和长春新碱处理后检测存活率发现，SAMHD1高表达的细胞株对阿糖胞苷的敏感性低于SAMHD1低表达的细胞株(图6C，R=0.65，P=0.0065）。然而，对于其他化疗药物如氟达拉滨未观察到药物治疗后的存活率与SAMHD1表达之间的显著相关性。
当环磷酰胺、地塞米松、阿霉素、奥沙利铂或长春新碱分别以四种不同的浓度与阿糖胞苷联合应用时，该相关性在联合长春新碱和奥沙利铂时减弱(图6D)，而对于阿霉素、环磷酰胺和地塞米松，相关系数只在个别较高浓度水平下降(图6D)。
图6. 联合化疗克服了SAMHD1高表达在B细胞淋巴瘤细胞系中的耐药作用
研究结论
综上，为了更好地预测MCL的治疗反应，本研究评估了SAMHD1的生物标记物的预测潜力，对MCL Young和Elderly试验和患者分析表明，SAMHD1蛋白的表达或突变状态与MCL患者基于阿糖胞苷治疗的RFS或CR率无关。体外药物实验表明SAMHD1高表达在单一疗法中介导阿糖胞苷耐药，类似于体内的MCL治疗，当与其他化疗药物联合使用时则无法介导耐药。
Roider T, Wang X, Hüttl K, et al. The impact of SAMHD1 expression and mutation status in mantle cell lymphoma: An analysis of the MCL Younger and Elderly trial. Int J Cancer. 2021 Jan 1;148(1):150-160. doi: 10.1002/ijc.33202.
CN-104014
本材料由阿斯利康支持，仅供医疗卫生专业人士参考
排版编辑：肿瘤资讯-Pinky
苏公网安备 32059002004080号
