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2026 AACR | 双重甲基化荧光定量PCR检测法，助力卵巢癌早期精准诊断

05月07日

编译：肿瘤资讯

来源：AACR官网

2026年美国癌症研究协会（AACR）年会于4月17日至22日在美国加利福尼亚州圣地亚哥盛大召开。在当地时间4月20日的壁报展示环节中，Deepa Bisht教授团队带来的关于上皮性卵巢癌（EOC）液体活检的研究成果（摘要号：LB117）备受瞩目。
既往已有研究发现，上皮性卵巢癌中常出现抑癌基因RUNX3与ZNF154的异常甲基化。基于此，Deepa Bisht教授研究团队开发了一种双重甲基化荧光定量PCR检测方法——即同时检测RUNX3与ZNF154的甲基化水平，并在组织样本与血清样本中对该检测体系进行测试。该检测法在游离DNA（cfDNA）样本中在两种基因中均展现出良好的敏感度和特异度。【肿瘤资讯】特将内容整理如下，供广大同道参考交流。

卵巢癌早筛困难，甲基化标志物成新方向

卵巢癌因其早期症状不典型且多在晚期确诊，导致患者的诊断和预后普遍较差。寻找有效的早期诊断标志物是改善患者生存的关键。

GpG岛是基因组中一段连续的DNA序列区域。CpG岛异常高甲基化可通过沉默抑癌基因发挥作用，是肿瘤发生的早期关键分子特征，同时也是可在多种体液中检测的理想肿瘤标志物。既往研究表明，肿瘤抑制基因RUNX3和ZNF154在卵巢癌中频繁出现异常甲基化，有成为cfDNA中生物标志物的潜力。

双重甲基化检测如何设计？内参基因如何校正？

该研究旨在评估RUNX3和ZNF154在EOC中的高甲基化水平及其诊断价值。

首先，研究团队通过靶向二代测序/亚硫酸氢盐扩增子测序（NGS/BSAS），确认了这些高甲基化CpG富集区在EOC中确实存在异常甲基化。基于初步数据，团队开发了一种双重甲基化荧光定量PCR检测法。

研究纳入100例组织样本（肿瘤70例、对照30例）及70例配对血清样本（肿瘤50例、对照20例），以COL2A1为内参基因，在组织与血清cfDNA中对该检测体系进行验证并评估其诊断效能。COL2A1是一个在正常细胞中稳定表达、甲基化状态恒定的基因。它的信号强度代表了样本中可检测的DNA总量，相当于给检测“定标”。通过计算目标基因（即RUNX3/ZNF154）的甲基化信号与COL2A1信号的比值（PMR）来消除样本质量、PCR扩增效率等技术因素的干扰，确保不同样本、不同批次的检测结果可以横向比较，提升诊断的准确性和重复性。